【摘 要】
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目的 通过研究烟草萃取物(CSE)对大鼠原代肺成纤维细胞自噬水平的影响及机制,以探讨香烟烟雾与肺部间质性疾病的关系.材料与方法 不同浓度CSE(0.5％,1％,1.5％,2％)刺激原代肺成
【机 构】
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南方医科大学南方医院呼吸内科,广州 510515
【出 处】
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广东省医学会第十八次呼吸病学学术会议暨2015岭南呼吸论坛
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目的 通过研究烟草萃取物(CSE)对大鼠原代肺成纤维细胞自噬水平的影响及机制,以探讨香烟烟雾与肺部间质性疾病的关系.材料与方法 不同浓度CSE(0.5％,1％,1.5％,2％)刺激原代肺成纤维细胞,进行ROS、H202及ATP含量检测,western blotting检测NOX4、LC3、beclin1、GAPDH蛋白表达量,流式细胞仪检测线粒体活性氧mitoSOX含量；GFP-mRFP-LC3腺病毒转染荧光检测自噬小体形成.分别予以NADPH氧化酶抑制剂DPI及线粒体活性氧抑制剂mito-TEMPO作用后,以及应用NOX4小干扰RNA行NOX4基因沉默后,western blotting检测上述蛋白水平.结果 CSE作用于大鼠原代肺成纤维细胞可诱导ROS、H2O2及mitoSOX显著增高,ATP水平明显下降(均p＜0.05)；western blotting显示不同浓度CSE刺激可激活NOX4、LC3以及beclin1的表达,其中以1％时刺激效果最为明显(p＜0.05)；激光共聚焦显示1％CSE刺激24小时后原代肺成纤维细胞中出现明显增强的自噬(代表autophagosoms的黄色小点增多)以及自噬流(代表autolysosomes红色小点增多)(均p＜0.05).加入DPI和mito-TEMPO作用后,LC3II/LC3I、beclin1蛋白表达出现下降,其中以mito-TEMPO作用更为明显(均P＜0.05)；对NOX4进行小RNA干扰后,CSE所诱导的LC3II/LC3I、beclin1蛋白表达均受到抑制,提示CSE可能通过NOX4来源以及线粒体来源的ROS诱导自噬的产生.结论 CSE可诱导大鼠原代肺成纤维细胞发生自噬,其机制可能通过产生ROS尤其是线粒体ROS而实现.
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