【研究目的】为了研究食源性病原菌产志贺毒素大肠杆菌(STEC)及其耐药性基因在养殖场、畜禽产品、使用畜禽粪便的农场和其农产品、环境中传播规律和趋势,为人类食品安全提供有力保障。【实验方法】选择长期使用抗生素的养殖场采集样品。每个采样点采90样品。每个样品至少收集10g。通过选择性培养基初步筛选出STEC并在-80℃保存备用。设计Stx1、Stx2、Stx2f、EaeA、EhxA特异性引物,进一步确定分离菌株是否属于STEC。以E.coli ATCC 25922为质控菌株,采用微量肉汤稀释法进行药敏实验,测定氨苄青霉素、四环素、阿奇霉素、链霉素、头孢噻呋、氯霉素、庆大霉素等15种抗生素对分离菌株的MIC。根据耐药表型设计氨苄青霉素耐药基因(blaTEM和blaPSE)、四环素耐药基因(tet(A)、tet(B)、tet(C)和tet(G))、链霉素耐药基因(aadA1/A2和strA/B)、氯霉素耐药基因cml、卡那霉素耐药基因aphAI、磺胺素类耐药基因sul1和sul2等耐药基因的特异性引物,确定各个耐药菌株含有的耐药基因。同时对各耐药菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析不同来源耐药菌株的同源性。【结果】本研究共采集1493个样品。分离的STEC占总数的16.81%。药敏实验结果表明,97.67%的菌株对链霉素表现为耐药性,30.23%的菌株对氨苄青霉素产生耐药性,40.86%的菌株对四环素表现为耐药性。PCR实验结果表明blaTEM基因以较高的频率被检测出来,检出率为83.78%,addA1基因检出率为45.83%。PFGE结果显示不同采样点采的样品有同源性,即养殖场的耐药菌可在该养殖场的农产品、周围环境、使用该养殖场畜禽粪便的农场及其产品等同样被检测出来。【结论】食源性致病菌STEC在畜禽养殖场、新鲜产品及周围环境之间的传播具有不可忽视的作用。该研究为食源性致病菌的潜在危害和传播方式提供了有力的证据。