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目的:本实验通过流式细胞术检测细胞凋亡,确定三氧化二砷(As2O3)及传统化疗药物对神经母细胞瘤(NB)细胞株SK-N-SH的毒性作用及半数杀伤浓度(IC50).证实As2O3、DDP及VP16对SK-N-SH细胞株耐药蛋白P-gp表达和细胞周期的影响.
方法:首先培养NB的SK-N-SH细胞株,然后采用流行细胞术Annexin V/PI法检测As2O3及传统化疗药物对SK-N-SH细胞株细胞凋亡的影响及IC50;通过Western blot检测SK-N-SH细胞中P-gp的表达以及As2O3或传统化疗作用后对其表达的影响;用流式细胞术对As2O3及传统化疗药物作用后的细胞进行细胞周期分析.
结果:1)随着As2O3给药浓度的增加细胞凋亡数增加，As2O3对SK-N-SH细胞的杀伤作用呈现浓度依赖性;同浓度As2O3作用于SK-N-SH细胞时，As2O3对SK-N-SH细胞的杀伤作用呈现时间依赖性。As2O3作用于SK-N-SH细胞IC50为3umol/L。2)As2O3可使细胞周期阻滞于G2/M期，空白对照组G2/M期细胞百分比为(3.13±2.8)％,48h实验组G2/M期细胞百分比为(18.75±3.44)，72h实验组G2/M期细胞百分比为(33.04±5.07)，空白对照组与实验组G2/M期细胞有显著差异(P<0.05),48h实验组与72h实验组G2/M期细胞有显著差异(P<0.05)。3)SK-NCH细胞膜耐药蛋白P-gp的表达并没有随着As2O3作用浓度和时间的增加出现升高。As2O3分别以2和3umol/L药物浓度作用于SK-N-SH细胞48h,72h及96h时，其胞膜P-gp的表达均出现显著降低(P<0.0;3umol/L的As2O3作用于SK-N-SH细胞72hP-gp的表达相对于2umol/L的As2O3作用72h显著降低(P<0.05);P-gp的表达在As2O3以IC50作用于SK-N-SH细胞72h时最低。随着DDP和Vp16作用浓度和时间的增加，SK-N-SH细胞膜P-gp的表达升高(P<0.01)。
结论:1)As2O3,DDP和Vp16均可对SK-N-SH细胞产生细胞毒性作用，具有浓度和时间依赖性。As2O3作用于SK-N-SH细胞IC50为3umol/L;DDP作用于SK-N-SH细胞IC50为Bug/ml;Vp16作用于SK-N-SH细胞IC50为100ug/ml.2)As2O3可使SK-N-SH细胞的细胞周期明显阻滞在G2/M期。DDP和Vp16可使SK-N-SH细胞的细胞周期阻滞在S期。3)As2O3作用于SK-N-SH细胞，不会使其胞膜P-gp的表达升高，且As2O3以IC50作用于SK-N-SH时可以显著降低SK-N-SH细胞膜P-gp的表达。4)传统化疗药物DDP和Vp16作用于SK-N-SH细胞时P-gp持续表达及升高。