【摘 要】
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纯化技术工业酶生产过程中的关键技术之一.许多传统生产中应用的纯化技术普遍存在耗时成本昂贵等缺点,这就制约了酶的扩大化生产.因此,开发一种能经济有效的分离纯化工业
【机 构】
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浙江大学生物系统工程与食品科学学院 杭州 310058
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纯化技术工业酶生产过程中的关键技术之一.许多传统生产中应用的纯化技术普遍存在耗时成本昂贵等缺点,这就制约了酶的扩大化生产.因此,开发一种能经济有效的分离纯化工业酶的方法是必须也是必要的.三相分离技术(TPP)是一种能够从混合物中分离纯化蛋白的有效且经济的技术.本文采用三相分离技术对黑曲霉发酵的混合粗酶进行纯化,以获得α-半乳糖苷酶.实验经过四个步骤形成三相体系,分别为(1)添加硫酸铵；(2)调节分离体系的pH；(3)添加叔丁醇；(4)静置及离心分相.优化三相体系的参数以获得最高的纯化倍数及α-半乳糖苷酶的回收率.当体系pH值为5.5,添加饱和度为60％ (w/v)硫酸铵,粗酶：叔丁醇为1∶1.5 (v/v)时三相体系最优.经过纯化后α-半乳糖苷酶纯化了6.27倍,回收率达97.21％.纯化后该酶的反应最优pH值及最佳温度与纯化前并未改变.三相分离技术在纯化黑由霉α-半乳糖苷酶展现的优势使其具有潜在的工业应用价值.
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