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本文建立了基于Bcl-2 的抗干眼症药物高通量筛选体系,为干眼症防治药物的研究提供一个理想的技术平台.首先建立了含有SV40 弱启动子、3×p53 binding site(p53BS)基序、不稳定型墨绿色荧光蛋白ZsGreen1-DR 基因片段的报告质粒p3p53BS-ZsGreen1DR.将其转染大鼠泪腺上皮细胞(LGEC),G418 筛选后获得了p53 反应性报告细胞株LGEC-ZsGreen1DR,即基于Bcl-2 的抗干眼症药物高通量筛选体系.p53 诱导表达实验结果表明,该加入P53 前及加入P53 在0 h 时,LGEC-ZsGreen1DR 表达荧光的平均光密度为0.010±0.003；加入P53 在4 h 时LGEC-ZsGreen1DR 的平均光密度为0.134±0.023；在12 h 达到高峰,平均光密度为0.401±0.124；在24h 时细胞平均光密度明显下降,平均光密度为0.149±0.045.将LGEC-ZsGreen1DR 细胞株冻存30 天,复苏并传代培养1 个月,加入P53 在0 h 时,LGEC-ZsGreen1DR 表达荧光的平均光密度为0.007±0.001；加P53 诱导4 h 后LGEC-ZsGreen1DR 的平均光密度为0.144±0.052；12 h 时的平均光密度为0.387±0.084；24h 时的平均光密度为0.188±0.034；说明LGEC-ZsGreen1DR 细胞株经冻存、复苏、传代后仍能有效反映P53 的诱导作用.