长牡蛎(Crassostrea gigas)新型吞噬受体CgNimC的功能研究

来源 :“全球变化下的海洋与湖沼生态安全”学术交流会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:coffeedoly
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  吞噬是进化上保守的细胞过程,通过内吞入侵的病原菌及体内凋亡或坏死的细胞,在抵御病原侵染及维持内环境稳态中发挥重要作用.本研究从长牡蛎(Crassostrea gigas)基因组中克隆得到一个含有1185 个碱基的新型Nimrod 家族吞噬受体(命名为CgNimC).CgNimC 受体含有三个典型的EGF-like 结构域,及其他含多EGF-like 结构域吞噬受体保守的半胱氨酸位点.RT-PCR 分析显示CgNimC 主要在长牡蛎外套膜和血细胞中表达,且在受到鳗弧菌Vibrio anguillarum 刺激后的血细胞中表达量显著增加(P < 0.01),表明其参与长牡蛎的免疫应答过程.将CgNimC 的胞外段基因序列与原核表达载体pET32(a+)连接,进行原核表达、纯化,得到大小约53KD 的重组蛋白rCgNimC,并制备多克隆抗体,运用Western-blot 检测rCgNimC 菌结合能力.rCgNimC 能直接结合革兰氏阴性菌Vibro anguillarum 和 Vibro splendidus,但不能与革兰氏阴性菌Staphylococci aureus、Micrococcus luteus 或真菌Yarrowia lipolytica、Pichia pastoris 结合.当微生物预先与长牡蛎血清孵育1h 后,rCgNimC 的结合能力显著增强,甚至能与S.aureus、M.luteus 和 Y.lipolytica 结合,表明rCgNimC 能识别不同微生物,并且其识别特性受血清调节.ELISA 实验表明rCgNimC 对LPS 有较高亲和力,对PGN 亲和力较低,而对GLU 没有亲和力.因此,rCgNimC 可能通过对LPS 的高亲和力介导了对革兰氏阴性菌的识别.体外将长牡蛎血细胞与抗rCgNimC 多克隆抗体孵育1 h 后,通过流式细胞仪及荧光显微镜检测血细胞的吞噬活性.实验结果表明,多抗封闭CgNimC 受体后,血细胞对革兰氏阴性菌V.splendidus(17.6±1.6%)、V.anguillarum(24.3±1.4%)的吞噬率比对照组(分别为24.8±3.5%和 30.5±1.2%)显著降低,但对革兰氏阳性菌M.luteus 和真菌Y.lipolytica 的吞噬率影响不显著.综上表明,CgNimC 是长牡蛎中的一个新型吞噬受体,能与LPS 结合,介导血细胞对革兰氏阴性菌的吞噬,且其识别特性受到血清分子的调节.为进一步了解软体动物免疫识别机制及吞噬过程提供了参考.
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