【摘 要】
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马立克氏病病毒(MDV)基因组DNA复制原点区的上游和下游均含有启动子TATA-box、CAAT-box等特征性的保守基元,推测是一个天然的双向启动子.为了在体外验证其双向启动活性,试验
【出 处】
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中国微生物学会兽医微生物专委会学术年会中国畜牧兽医学会生物制品学分会第九次学术研讨会
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马立克氏病病毒(MDV)基因组DNA复制原点区的上游和下游均含有启动子TATA-box、CAAT-box等特征性的保守基元,推测是一个天然的双向启动子.为了在体外验证其双向启动活性,试验以MDVpp38为报告基因插入到pUC18中,构建了pUC-pp38质粒,并将包含该启动子完整区域的789bp序列分别以正反两个方向克隆进pUC-pp38质粒中pp38报告基因的上游,获得的重组质粒pProfpp38和pProrpp38.将所获得的重组质粒分别转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过间接免疫荧光试验检测pp38基因的表达以验证该启动子的双向启动活性.实验结果表明:马立克氏病病毒复制原点区的启动子无论以何种方向插入pUC-pp38质粒中,在转染转染细胞24小时内能检测到pp38基因的表达,48小时后能获得高效和持续的表达.同时,我们通过通过PCR技术,逐渐缩小该启动子的范围,最终在320bp时,仍能检测到两个方向的启动活性.
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