【摘 要】
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目前,神经干细胞的研究多集中于脑源性神经干细胞的研究,对脊髓源性神经干细胞的研究为数不多。实验证明,在胚胎以及成体的脊髓中有神经干细胞的存在,成年哺乳动物脊髓室
【机 构】
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山西医科大学医学实验中心分子牛物学实验室,太原030001
【出 处】
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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第七届全国学术会议(The 7th Biennial Meeting and the
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目前,神经干细胞的研究多集中于脑源性神经干细胞的研究,对脊髓源性神经干细胞的研究为数不多。实验证明,在胚胎以及成体的脊髓中有神经干细胞的存在,成年哺乳动物脊髓室管膜细胞即为神经干细胞。因为神经干细胞的未分化状态是其内多种基因协调表达的结果,研究此过程中的mRNA对神经干细胞生物学性状的了解具有重要的指导意义。本实验通过体外培养技术获取到脊髓源性神经干细胞,选用Clontech公司的Necleospin RNA Ⅱ试剂盒来进行总RNA提取,选用Clontech公司的NucleoTrap(R)；核酸纯化试剂盒来纯化mRNA,之后使用PowerScript反转录酶来合成cDNA第1链,使用CDS Ⅲ/3 PCR引物和5PCR引物来合成双链cDNA,Sfi Ⅰ消化后用CHROMA SPIN-400来进行cDNA的分部分离,去除小于500 bp的片断后与TriplEx2噬菌体左、右臂连接,用Stratagene公司的Gigapack(R) Ⅲ金包装提取物进行包装反应,成功构建了cDNA文库,之后对文库进行了扩增。所得的cDNA文库为脊髓源性神经干细胞的研究提供了永久的cDNA来源,可以方便地从cDNA文库中筛选到所需的目的基因,并直接用于该目的基因的表达。同时cDNA文库也具有广泛的应用前景,由于其含有在正常状况下脊髓源性神经干细胞表达基因的信息,提供了神经干细胞研究的一个总框架,为从mRNA水平了解脊髓神经干细胞的性状提供便利,结合差异显示技术也能为进一步筛选和克隆与神经发育以及定向分化的相关基因奠定基础。
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