【摘 要】
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顶复亚门原虫的微线蛋白在入侵过程主要发挥粘附素的作用,介导虫体粘附宿主细胞.关于弓形虫、疟原虫等顶复亚门原虫的微线蛋白研究较多,而新孢子虫微线蛋白鲜有报道.我们
【机 构】
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中国农业大学,动物医学院,北京 100193
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
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顶复亚门原虫的微线蛋白在入侵过程主要发挥粘附素的作用,介导虫体粘附宿主细胞.关于弓形虫、疟原虫等顶复亚门原虫的微线蛋白研究较多,而新孢子虫微线蛋白鲜有报道.我们利用ToxoDB数据库中的信息,发现编号为NCLIV-062770序列与弓形虫MIC8具有高度同源性,将其定名为NcMIC8.本研究拟对NcMIC8进行克隆表达,对其定位、功能及生物学特性进行初步探索.应用生物信息学软件分析,NcMIC8基因全长2049bp,无内含子,N端有信号肽,C端有一个跨膜区.该蛋白含有682个氨基酸残基,分子量为73.8KD,等电点是5.14,含有7个表皮生长因子样结构域(Epidermal Growth Factor,EGF domain),蛋白具有较高的抗原性和亲水性.截去MIC8的信号肽和跨膜区,选取抗原性和亲水性较高的部分进行克隆、表达.纯化了His标签融合表达的MIC8重组蛋白,纯化蛋白并制备兔源和鼠源的多克隆抗体.western blot显示抗体能够与内源性蛋白反应.在对虫体内源性MIC8进行鉴定时发现其具有两个不同分子量的条带,推测该蛋白可能存在前体和成熟体两种形式,且前体主要在胞外虫体.胞外虫体的MIC8与MIC3均定位于虫体前端的微线体.anti-NcMIC8的血清能够有效阻断虫体入侵宿主细胞,说明该蛋白在虫体的入侵过程中发挥重要作用.MIC8可以粘附于宿主细胞的表面,在1％无水乙醇的刺激下能够分泌到培养介质中,发挥黏附素的功能.在新孢子虫中MIC3和MIC8是复合体的形式,且与MIC3形成复合体的MIC8是蛋白成熟体形式.
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