热带假丝酵母菌ERG11原核表达载体构建及表达

来源 :第六届海南省生命科学联合学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kaixinlfy
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  研究背景临床假丝酵母菌的致病及耐药呈上升趋势;白假丝酵母菌靶位酶基因ERG11的突变和过度表达是其对唑类药物耐药的分子机制之一。 然而,ERG11在热带假丝酵母菌对唑类药物的相关性研究较少,尚不确定。目的构建热带假丝酵母菌靶位酶ERG 11基因原核表达载体,为深入探讨耐药分子机制奠定基础。 方法以热带假丝酵母菌氟康唑敏感株及耐药株为实验菌株,提取基因组DNA;根据GENEBANK ERG11基因序列设计引物、基因扩增;先构建pMD18-ERG11重组克隆载体,再构建pET-ERG11原核表达载体,经酶切、PCR及序列分析鉴定,转化BL21大肠杆菌;SDS-PAGE对表达产物进行了初步鉴定。结果PCR扩增出ERG11基因,片段大小与预期相符,约800bp,经酶切及PCR及测序鉴定为正确重组质粒;SDS-PAGA蛋白电泳观察,获得表达产物。结论构建成功热带假丝酵母菌靶位酶ERG11原核表达载体,为进一步探讨ERG11基因与氟康唑耐药的相关性奠定了实验基础。
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