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目的:检测miR-30c在人胃癌组织和体外培养的人胃癌细胞中的表达水平,探讨miR-30c异常表达与胃癌发生的相关性,揭示相关分子机制。方法:(1)体外培养分化不同的2株胃癌细胞,以获得永生化而无致癌性的人胃黏膜上皮细胞为对照;(2)采用Real-time PCR技术进行验证在82对配对样本胃癌组织与癌旁远端组织中miR-30c、myc和PPAR8的差异表达。将临床资料按照患者年龄、肿瘤大小、分期、淋巴结转移等因素进行分组。(3)结合前期实验室获得的miRNA芯片表达数据,预测miR-30c调节的靶基因。(4)常规进行组织标本包埋、切片、系列脱蜡后进行采用免疫组化技术研究胃癌组织中BCL-9和GJA1的表达情况,并分析BCL-9和GJA1的表达与患者临床资料的相关性。(5)采用miR-30c-mimic、miR-30c-inhibitor和Negtive Control(NC)调控胃癌细胞中miR-30c的表达,瞬时转染后进行MTT法检测细胞增殖能力,利用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况,qRT-PCR、Western Blot检测miR-30c靶蛋白BCL-9及下游基因myc和PPARδ的表达情况。结果:(1)胃癌miRNAs表达谱微阵列芯片筛选出表达升高或降低的miRNAs,其中下调最显著的miR-30c,下调8.36倍(p<0.05)。采用Real-time PCR技术扩大样本进行验证82对胃癌组织与癌旁远端组织配对样本中发现,miR-30c在胃癌及癌旁组织中存在差异表达(P<0.05),其表达趋势与芯片结果一致。miR-30c表达下调水平与患者年龄相关(P<0.05)。(2)免疫组化检测结果显示,胃癌组织中BCL-9、GJA1的表达与肿瘤分化程度、浸润深度、是否有淋巴转移、是否有脉管侵犯等临床资料无关(P>0.05)。(3)Real-time PCR检测显示胃癌及癌旁组织中PPARδ和Myc在癌组织中表达降低,但与癌旁组织比较差异无显著性(P>0.05)。(4)转染miR-30c-mimic后细胞的增殖显著能力降低,MKN-45在转染后72h抑制率最高为18%,但与NC组比较在24h、48h、72h组间没有差异(P>0.05)。MKN-74在转染后72h抑制率最高为17%,且较NC组24h与48和72小时有差异(P<0.05)。GES-1则在转染后48h达到最高抑制率大26%,在48h与24和72小时与NC组相比较抑制率存在差异(P<0.05)。而转染miR-30c-inhibitor后,细胞的增殖能力则增强,MKN-45在转染24h后细胞增殖提高18%,与NC组比较24h与48和72小时组间比较存在差异(P<0.05)。MKN-74在转染后48h达到30%,在24h、48h、72h时与NC组比较组间存在差异(P<0.05)。GES-1则在转染后72h时细胞增殖能力增强12%,且24h、48h、72h时与NC组比较组间存在差异(P<0.05)。(5)miRNA-30c-mimic转染三株细胞48h后,MKN-74细胞凋亡率则较NC组降低(P<0.05),而在GES-1细胞系中miRNA-30c-mimic组较NC组凋亡率升高(P<0.05)。转染miRNA-30c-inhibitor 48h后,MKN-45凋亡比率较NC组升高(P<0.05),MKN-74细胞凋亡率则较NC组降低(P<0.05),进一步比较可以发现,在MKN74和GES1细胞系中转染miRNA-30c-mimic较miRNA-30c-inhibitor组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),即miRNA-30c-mimic促进凋亡,miRNA-30c-inhibitor则可以抑制凋亡,而在MKN45中则反之,(6)在MKN45细胞系中,转染miR-30c-mimic后较NC组G0/G1期细胞数量增加(P<0.05),而在MKN74和GES1细胞系中,miR-30c-inhibitor后较NC组G0/G1期细胞数量增加(P<0.05)。(7)Western Blot检测显示,在MKN-74细胞系中转染miR-30c-mimic后较NC组(阴性对照组)BCL9表达升高,转染miRNA-30c-inhibitor后BCL9的表达较NC组降低;而在永生化的GES-1细胞系中,转染miR-30c-mimic后,BCL9表达较NC组均有所降低,但转染miR-30c-inhibitor后,BCL9表达增高较NC组明显升高。结论:(1)miR-30c在胃癌组织中呈低表达,并通过改变细胞增殖、凋亡和细胞周期参与胃癌的发生、发展。(2)miR-30c对BCL9的调节关系在不同分化细胞系中影响不一,可能是多种因素综合作用所致,具体机制有待进一步研究。