转录因子和蛋白互作在同一个实验流程中的系统筛选

来源 :中国植物病理学会2016年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:aaaaLLLLL
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  基于对酵母单杂交和双杂交的整合改进,我们建立了一项One-for-All酵母文库杂交技术.本技术可在一个实验流程中同时系统高效筛选全基因组中的转录因子和蛋白互作.在典型的转录因子中,DNA结合结构域和激活结构域是共价相连的.酵母单杂交是基于DNA结合结构域筛选特定转录因子的,无法同时筛选各种不同的转录因子.本技术是基于保守的激活结构域筛选转录因子的.我们的研究表明,在酵母的质粒表达系统中,各种各样的转录因子都能激活报告基因.转录因子的激活结构域在进化上是保守的,在功能上是非特异性的.转录因子功能的特异性主要是其DNA结合结构域决定的.转录因子的主要功能是激活RNA聚合酶促进基因表达.RNA聚合酶在所有的生命体里都是非常保守的且种类极少.RNA聚合酶这种高度保守的特性也决定了转录因子的激活结构域的保守性和非特异性.我们证明了转录因子的这种特性并利用这种特性在基因组水平上系统筛选了所有可能的转录因子.对于蛋白互作的筛选,我们进行了文库对文库的杂交,系统筛选了可能互作的蛋白.本研究整合了转录因子与蛋白互作的筛选,使二者的筛选融入到同一个实验流程中.
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