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选取H3N2亚型猪流感病毒血凝素(Hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase，NA)基因保守序列，使用Primer Express 2.0软件设计出特异性引物和TaqMan MGB探针，利用实时荧光定量PCR技术来检测猪流感病毒。使用含有选定检测序列的重组质粒pMD-H3、pMD-N2标准品做标准曲线，结果表明该方法的灵敏度为100拷贝/反应，标准曲线的相关系数分别为0.99015(H3)、0.99947(N2)，除猪流感病毒H3N2亚型外，猪流感病毒H1N1亚型、H9亚型与其他5种猪病病毒检测均为阴性，样品检测与病毒滴定及病毒分离结果的符合率均为100％，该方法特异性好、重复性佳，为H3N2亚型猪流感病毒检测提供了一种特异、敏感、快速的定量检测方法。