【摘 要】
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目的:研究Vero细胞宿主蛋白(hostcellprotein,HCP)的过敏原性,建立定性和相对定量检测Vero细胞宿主蛋白的方法,并用所建立的方法检测Vero细胞乙脑疫苗和SARS疫苗中HCP的变化
【机 构】
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北京生物制品研究所,北京,100024
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目的:研究Vero细胞宿主蛋白(hostcellprotein,HCP)的过敏原性,建立定性和相对定量检测Vero细胞宿主蛋白的方法,并用所建立的方法检测Vero细胞乙脑疫苗和SARS疫苗中HCP的变化及含量.
方法:取不同剂量的Vero细胞宿主蛋白和Vero细胞裂解蛋白经腹腔致敏豚鼠,末次致敏后第21天攻击,观察攻击后的反应;模拟Vero细胞疫苗生产工艺,制备Vero细胞HCP及抗Vero细胞HCPIgG,采用SDS-PAGE和Western-bolt方法定性检测Vero细胞乙脑疫苗和SARS疫苗各中间产品中的HCP及病毒抗原成分的含量变化;确立了酶标法相对定量检测Vero细胞疫苗中宿主细胞蛋白的方法,并用该方法对Vero细胞乙脑疫苗的中间产品中HCP进行定量分析.
结果:攻击后30min,100ng/只以上剂量组均出现过敏反应,反应强度与剂量成正相关,50ng/只以下不引起过敏反应,24h各剂量组过敏反应的恢复情况各不相同;SDS-PAGE和Western-bolt方法可以定性检测Vero细胞乙脑疫苗和SARS疫苗各中间产品中的HCP及病毒抗原成分的含量变化;酶标法可以检测加入保护剂前任何阶段产品中的Vero细胞HCP的含量.
结论:Vero细胞蛋白和Vero细胞裂解蛋白均可引起豚鼠的过敏反应,Vero细胞裂解蛋白反应强高于Vero细胞蛋白;[3]随着生产工艺的进行,疫苗中间产品中HCP的含量逐渐降低,病毒成分的纯度逐渐增高,但纯化后产品中仍存在少量HCP;[4]间接ELISA法可以相对定量检测Vero细胞疫苗HCP的含量.[5]
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