大气PM2.5水溶成分和非水溶成分对人肺上皮细胞A549的毒性研究

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目的:探讨大气PM2.5水溶成分和非水溶成分对A549细胞活性、细胞膜完整性、氧化应激和炎症介质的影响。方法:采集南昌前湖校区大气PM2.5,制备PM2.5水溶成分和非水溶成分;采用MTT细胞毒性试验检测大气PM2.5水溶成分和非水溶成分对A549细胞存活率的影响。采用微量酶标法检测上清液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、细胞超氧化物歧化酶(SOD)活力,流式细胞仪测定细胞活性氧(ROS),ELISA及RT-QPCR法测定炎性因子IL-6和TNF-α的表达量。结果 :1.PM2.5水溶成分低浓度(50、100μg/mL)染毒时即对A549细胞生长表现出显著毒性作用,而PM2.5非水溶成分高浓度(400μg/mL)染毒时才对A549细胞生长表现出显著毒性作用;PM2.5水溶成分50μg/mL染毒6h时,细胞存活率最低为35.6%,PM2.5非水溶成分染毒浓度最高(400μg/mL)且染毒时间最长(72h)时,表现为最大的细胞毒性效应,细胞存活率为41.3%。2.暴露于不同浓度的PM2.5各成分细胞培养上清中LDH漏出量均增多,小于100μg/mL时随染毒浓度的增高而升高,200μg/mL时LDH释放水平有所下降。相同染毒剂量下,PM2.5非水溶成分染毒后细胞上清中LDH活力显著高于同浓度的PM2.5水溶成分。3.相同浓度剂量组,PM2.5非水溶成分细胞内ROS的水平明显高于PM2.5水溶成分,PM2.5水溶成分高浓度染毒组(200μg/mL)时细胞SOD活力显著高于PM2.5非水溶成分。4.各浓度剂量组A549细胞IL-6、TNF-α分泌量以及mRNA表达量均升高,PM2.5水溶成分升高细胞TNF-α分泌量的作用可能强于PM2.5非水溶成分,各染毒浓度PM2.5水溶成分其对应的IL-6相对表达量显著高于同浓度的PM2.5非水溶成分,PM2.5水溶成分在高剂量染毒组(200、400μg/mL)时,A549细胞TNF-αmRNA相对表达量显著高于同浓度PM2.5非水溶成分。结论:大气PM2.5水溶成分和非水溶成分均可抑制A549细胞活性,破坏细胞膜完整性,促进细胞氧化应激反应,以及诱导细胞的炎症反应,从而对A549细胞产生毒性作用;但对细胞产生的毒性有明显差异,在抑制细胞活力、细胞膜损伤与氧化应激方面PM2.5非水溶成分的毒性作用显著强于水溶成分,在造成炎性损伤方面显著低于水溶成分。
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