【摘 要】
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目的：成功构建携带SFRP2基因的腺病毒载体.方法：从pGBKT-SFRP2质粒中扩增人SFRP2基因,将SFRP2基因亚克隆至质粒穿梭载体pAd-Track-CMV.用脂质体转染法将重组腺病毒pAd-Track-PPARγ2-CMV和pAdEasy-1共转染293细胞,成功构建的重组腺病毒Ad-SFRP2,确定转染效率.原代培养人增生性瘢痕成纤维细胞,利用Ad-SFRP2感染该细胞.通过RT-P
【机 构】
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湖北宜昌葛洲坝东湖社区卫生服务中心全科诊室 第三军医大学附属西南医院整形外科
【出 处】
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中国医师协会美容与整形分会西南工作委员会成立大会暨首届西南美容与整形学术大会
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目的：成功构建携带SFRP2基因的腺病毒载体.
方法：从pGBKT-SFRP2质粒中扩增人SFRP2基因,将SFRP2基因亚克隆至质粒穿梭载体pAd-Track-CMV.用脂质体转染法将重组腺病毒pAd-Track-PPARγ2-CMV和pAdEasy-1共转染293细胞,成功构建的重组腺病毒Ad-SFRP2,确定转染效率.原代培养人增生性瘢痕成纤维细胞,利用Ad-SFRP2感染该细胞.通过RT-PCR和Western Blot分别检测感染后人瘢痕成纤维细胞及对照组细胞中SFRP2基因mRNA和蛋白表达水平.
结果：RT-PCR检测结果显示腺病毒Ad-SFRP2的PCR产物约为904bp,SFRP2mRNA表达水平明显增高;用抗SFRP2多克隆抗体进行Western blot检测为阳性,感染的充足腺病毒载体在人瘢痕成纤维细胞中SFRP2蛋白有较高的稳定表达.
结论：成功构建含有人SFRP2基因的重组腺病毒Ad-SFRP2;它可有效提高人增生性瘢痕成纤维细胞中SFRP2基因的表达水平.
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