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目的:研究Ca MKⅡ(calmodulin-dependent protein kinase)磷酸化作用对calmodulin(Ca M)及其钙离子结合位点突变体Ca M12、Ca M34和Ca M1234与心肌Ca V1.2钙通道C末端(CT1)结合作用的影响。方法:通过质粒转化筛选获得转化成功的BL21菌株。进一步采用IPTG诱导GST融合蛋白表达,利用能识别并结合GST的GS-4B beads进行CT1和Ca M及其突变体Ca M12、Ca M34和Ca M1234融合蛋白的分离纯化。采用GST pull-down assay实验方法,检测不同[Ca2+]存在的情况下,Ca MKⅡ磷酸化对Ca M及其突变体与心肌CT1钙通道片段结合作用的影响。结果:本研究实验结果表明,在[Ca2+]为100 n M(静息钙离子浓度)时Ca M在0.7、1.4、2.1、3.5μM浓度时,其与Ca MKⅡ处理的CT1的结合作用显著升高(p﹤0.05),并以在较低Ca M浓度下磷酸化所致的差别最明显。在[Ca2+]为2m M时Ca M在0.7、1.4、2.1、3.5μM浓度时,其与Ca MKⅡ处理的CT1的结合作用显著升高(p﹤0.05),并以Ca M在较高浓度下磷酸化所致的差别明显。Ca M钙结合位点突变体Ca M12、Ca M34、Ca M1234与CT1的结合主要也受磷酸化和自身浓度的影响。结论:Ca MKⅡ介导的磷酸化作用可增加Ca M及其突变体与心肌Ca V1.2钙通道C末端片段CT1的结合作用,并且这种促进作用同时受[Ca2+]和Ca M及其突变体本身浓度的影响。