白藜芦醇通过TLR4与PI3K/Akt信号通路发挥抗IL-1β诱导的骨关节炎作用的体外实验研究

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目的探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)是否可以通过调控TLR4与PI3K/Akt信号通路发挥抗IL-1β诱导的SW1353细胞炎症反应,为进一步阐明OA的发病机制及探索OA的营养防治措施提供实验依据。方法 SW1353细胞分别经RES(0~100μmol/L)、IL-13(10 ng/mL)处理24 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖活力。RES(50μmol/L)与IL-1β共同处理细胞24 h,ELISA法检测细胞培养上清中MMP-13表达水平,Westernblot法检测TLR4蛋白表达水平。RES与IL-1β分别处理细胞(10min~2h),Westernblot法检测p-Akt蛋白表达水平。TLR4抑制剂CLI-095(1μg/mL)预处理细胞6 h后,RES、IL-1β处理细胞30 min,Western blot法检测p-Akt蛋白表达量;处理24 h,检测TLR4的蛋白表达量。PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002(25μmol/L)处理细胞1 h,RES、IL-1β处理细胞30 min,Western blot法检测p-Akt的蛋白表达量;处理24h,检测TLR4的蛋白表达量。结果 CCK-8结果显示:IL-13(10ng/mL)对细胞增殖活力无明显影响(P>0.05),RES(3.125~50μmol/L)可促进细胞增殖活力(P<0.05),RES(100μmol/L)则对其有明显的抑制作用(P<0.01)。ELISA及Western blot结果显示:IL-1β可使MMP-13与TLR4表达量显著升高(P<0.01),RES(50μmol/L)则显著抑制MMP-13与TLR4表达(P<0.01)。IL-1β与RES均可激活PI3K/Akt信号通路,p-Akt表达量显著增多(P<0.05)。CLI-095预处理可抑制TLR4表达(P<0.05);同时IL-1β与RES对PI3K/Akt信号通路的激活作用也被抑制,p-Akt表达量显著下降(P<0.05)。LY294002预处理可抑制RES激活PI3K/Akt信号通路的作用,p-Akt表达量下降(P<0.05);同时IL-1β激活TLR4信号通路的作用被加强,而RES使TLR4表达减少的作用则被抑制,TLR4的蛋白表达量均显著增加(P<0.01)。结论 RES对IL-1β处理的SW1353细胞具有抗OA效应,这可能与其调控TLR4、PI3K/Akt信号通路有关;并且TLR4信号通路与PI3K/Akt信号通路之间可能存在某些相互作用,但其中的具体机制仍需进一步探讨。
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