一种基于NASBA和G4DNAzyme的猪瘟病毒可视化鉴别检测的方法

来源 :2017猪瘟防控技术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Arqiu
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
猪瘟病毒是猪的一种重要病原,流行广泛、危害大,是一种急性、高度接触性传染病,造成养猪业重大损失.几十年前,中国就已经采取接种弱毒疫苗免疫与捕杀等措施,有效地对猪瘟的流行进行控制,然而现今临床上仍缺乏一种有效的方法来鉴别野毒感染和疫苗株,因此需要研发新型的猪瘟快速鉴别诊断技术.G4DNAzyme和氯高铁血红素(He-min)结合形成DNA过氧化物酶,能催化H2O2氧化ABTS2-(2,2-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)生成有颜色的产物,近年来,该反应过程被发现可应用于DNA的检测,是目前广受关注的一类可视化核酸检测方法.更重要的是,研究发现利用拆分的G4DNAzyme系统能够区别核酸中的单个碱基突变.NASBA也叫核酸等温扩增反应是一种RNA扩增方法,能在单一温度下对靶RNA进行扩增,可以避免使用变温的热循环装置.本研究首次成功地将可视化拆分的G4DNAzyme系统和NAS-BA技术相结合,运用于RNA病毒-猪瘟病毒的检测,建立了一种新的猪瘟病毒核酸鉴别诊断方法.具体检测原理见图示.
其他文献
有研究认为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV,俗称"猪蓝耳病病毒")的存在会抑制猪瘟弱毒疫苗的免疫反应,从而影响猪瘟疫苗免疫后抗体的产生.也有研究证明C株猪瘟兔化弱毒疫苗成功免疫一次后能给猪只提供长时间,甚至终生保护,而实际中生长猪往往多次免疫猪瘟疫苗."瑞兰稳"(猪蓝耳病、猪瘟二联弱毒疫苗),作为新的创新性联苗产品,不少从业者对其免疫效果存在疑问.本研究旨在通过田间临床试验进一步了解在生产条件下
用4~5周龄仔猪20头,对猪瘟病毒E2蛋白重组杆状病毒灭活疫苗、猪瘟兔化弱毒疫苗(脾淋源)、猪瘟兔化弱毒疫苗(ST传代细胞源)进行效力对比试验.试验分四组,每组5头,分别免疫上述疫苗,第四组对照组;一免后21日进行二免,二免后14日,所有猪只耳后肌肉注射石门系标准强毒株1ml/头(含106最小致死量),攻毒测温,观察临床症状.结果显示:对照组在攻毒第6~10日后死亡,免疫组除少数试验猪体温稍有升高
猪瘟(Classical Swine Fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus,CSFV)引起的一种猪的高度接触性传染病[1].对于猪瘟的防控,最有效的方法依然是疫苗免疫.母源抗体水平的高低会影响疫苗免疫后抗体的产生,干扰猪瘟疫苗的免疫效果.因此,本研究将猪瘟疫苗分别免疫不同母源抗体水平的仔猪,通过免疫后抗体的产生规律,为临床上正确使用猪瘟疫苗提供参
本试验主要通过追踪观察不同时间点猪瘟母源抗体消减规律来确定仔猪猪瘟活疫苗首次免疫接种日龄,并对优化后的免疫程序进行评价.结果发现了仔猪猪瘟疫苗首免日龄普遍后延的现象.
猪瘟(classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)引起的猪的急性、热性、高度接触性传染病,世界动物卫生组织将其列入OIE疫病名录,为须申报的动物传染病,中国已将其列为一类动物传染病.猪瘟病毒E2囊膜糖蛋白是CSFV主要保护性抗原蛋白,能诱导机体产生CSFV的中和抗体,保护机体免受病毒的侵染.本研究采用Bac-t
猪瘟是由猪瘟病毒引发的高接触性传染病,已被列为中国一类动物疫病,可通过妊娠垂直传播,也可经直接和间接接触水平传播,其防治方法以疫苗预防为主.随着疫苗的应用和养殖环境的改变,猪瘟病毒核酸结构也发生了一些改变,以E2基因分群,当前中国的猪瘟病毒以1.1型和2.1b型为主,毒力降低,新生仔猪和妊娠母猪带毒的免疫耐受性提高,流行现状呈易感、持续、散点状,易与其他病毒多重感染,防控难度较高.猪瘟防控技术主要
猪瘟(Classical Swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起猪的高度致死性、接触性传染病.本实验室利用化学发光免疫分析技术(Chemiluminescence immunoassay,CLIA),首次建立了一种猪瘟抗体的化学发光检测方法.
目前,按照相关规程,国内兽用生物制品生产厂家对猪瘟活疫苗的效力检验均采用兔体感染量(Rabbit infective dose,RID)进行检测.由于实验兔的来源、体重、兔子对病毒的个体敏感性差异等因素,导致该方法检测周期长、检测结果不准确、重复性差等缺陷.因此,急需对猪瘟疫苗效价替代方法进行研究.由于CSFV感染细胞后不产生细胞病变(CPE),因此,CSFV的分离、鉴定及病毒含量测定通常选择免疫
猪瘟是由猪瘟病毒引起猪的一种高度接触性、致死性传染病.是中国养猪业最重要疫病之一,长期以来,兽医工作者先后研制了有效的疫苗、建立了中和试验、间接血凝试验(IHA)、酶联免疫吸附试验(EUSA)、胶体金技术等监测诊断方法,但对猪瘟抗体快速检测技术存在不足.为此,本研究应用镧系元素做荧光标记物建立一种既具有金标层析技术简单方便、快捷,又具有ELISA准确、特异、敏感的猪瘟抗体镧系荧光免疫层析快检试剂盒
猪瘟病毒(CSFV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)和口蹄疫病毒(FMDV)是猪的急性、高度传染性疾病,经常混合感染,鉴别诊断困难,被世界动物卫生组织(OIE)列为跨界传播疫病,也是中国动物及动物产品国际贸易中重要的检疫对象.目前样品中的多目标检测都是通过多次试验来完成,费时费力,不能满足大批量动物和产品快速通关的检疫需要,且难以实现样品中存在的混合感染以及症状相似疫病的鉴别诊断.为此,本研究建立了CS