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目的 化-物CH03是我所自主研究开发的新型小分子化合物,本实验室前期研究发现其对多种诱导剂所致神经细胞损伤均具有显著改善作用.本研究旨在观察化合物CH03对脂多糖(LPS)所致小鼠小胶质细胞瘤细胞BV2激活的抑制作用.方法 100 ng/mL LPS作用BV2细胞构建神经炎症细胞模型,采用可见光观察、MTT法、ELISA、Gress法、DCF-DA荧光探针、Western Blot、免疫荧光检测化合物CH03 (0.1,1,10 μmol/L)对BV2细胞激活的影响.结果 形态学观察结果表明,LPS模型组细胞呈阿米巴状,1、10 μmol/L CH03组,细胞折光度良好,阿米巴状细胞数明显减少.MTT结果表明,与空白对照及LPS组比较,CH03各剂量对细胞存活率均无显著影响,说明CH03对静息及活化状态下的BV-2细胞存活率均无显著影响.ELISA结果显示,LPS组的细胞培养上清中nF-α、IL-1β量分别为2059±33 pg/mL、169±5pg/mL(空白对照组为54±14 pg/mL、58±11pg/mL),而0.1、1、10 μmol/L CH03组TNF-α含量分别为2065±12 pg/mL、1954±28 pg/mL、1506±35 pg/mL,IL-1β含量分别为172±6 pg/mL、130±6 pg/mL、88±8 pg/mL,即1、10 μmol/L CH03均能显著抑制炎症因子TNFα、IL-1β的释放.Gress实验结果表明,LPS组细胞培养上清中NO含量为100.0％±0.5％(空白对照组28.9％±0.5％),0.1、1、10 μmol/L CH03组NO含量分别为95.7％±1.6％、89.4％±1.7％、79.1％±4.2％,即CH03可显著抑制LPS诱导的BV2细胞生成NO.DCF-DA荧光探针检测胞内ROS结果显示,1、10 μmol/L CH03组细胞绿色荧光强度较LPS组显著降低.Western Blot、免疫细胞荧光结果显示,CH03可剂量依赖性抑制LPS诱导的NF-κB/p65入核,抑制JNK、p38的磷酸化,抑制iNOS、COX-2胞内表达.即CH03可通过抑制NF-κB入核、MAPK通路的活化,抑制炎症蛋白iNOS、COX-2表达,进而抑制炎症因子ROS、NO、TNF-α、IL-1β的生成.结论 化合物CH03对LPS所致BV2细胞炎症具有明显保护作用,提示CH03可能具有抗神经炎症的作用,对于对抗神经退行性疾病的研究可能具有重要意义.