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目的:在肿瘤患者自体CIK细胞培养方法的基础上,改进添加刺激因子种类和剂量,获得高比例和高活性的CIK细胞。方法:1分离8例肺癌患者外周血淋巴细胞;2计数,按密度1×106/ml加入适量无血清细胞培养液(含10%自体血浆),并加入浓度为1000U/ml的rhIFN-γ,等量接种于培养瓶中;3包被抗体:A组:预先包被mAbCD3于培养瓶中,B组:预先包被mAbCD16和mAbCD3于培养瓶中;4次日将细胞从未包被抗体的培养瓶中转入包被抗体的培养瓶中,加入等倍体积的细胞培养液,并加入1000U/ml的rhIL-2;5第5天细胞转入培养袋中培养,并加入500ml无血清细胞培养液(含1000U/ml的rhIL-2),第10天加入500ml无血清细胞培养液(含1000U/ml的rhIL-2)。培养至第14天收获细胞。结果:1A组和B组细胞总数扩增倍数为:377±62倍和346±54倍。2A组细胞中CD3+CD56+的比例由培养第0天的6.34±2.13%到第14天的14.70±4.91%,差异有统计学意义;B组细胞中CD3+CD56+的比例由培养第0天的6.34±2.13%到第14天的38.87±9.75%,p<0.05,差异有统计学意义;培养第14天A组细胞与B组细胞CD3+CD56+比例比较,p值<0.05,差异有统计学意义。3流式细胞术检测培养第14天CD3+CD56+细胞内细胞因子分泌情况,分别为:36.84±5.22%和60.26±14.37%,p值<0.05,差异有统计学意义。4流式细胞术检测培养第14天B组细胞在效靶比40:1时对K562细胞的杀伤率为55.89±7.36。结论:在传统方法基础上加入mAbCD16,培养14天能获得高表达CD3+CD56+和高活性的CIK细胞。