【摘 要】
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目的:探讨bFGF和低氧诱导VEGF分泌的作用机制及其信号通路,为抗肿瘤血管生成的研究提供新的实验依据. 方法:以人乳腺癌细胞系T47D为对象,采用双夹心ELISA方法定量细胞分泌
【机 构】
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内蒙古医学院基础医学院,呼和浩特市,010059
【出 处】
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第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议
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目的:探讨bFGF和低氧诱导VEGF分泌的作用机制及其信号通路,为抗肿瘤血管生成的研究提供新的实验依据.
方法:以人乳腺癌细胞系T47D为对象,采用双夹心ELISA方法定量细胞分泌的VEGF;Westernblot方法检测细胞内HIF-1α蛋白和磷酸化ERK1/2,并以β-tubulin作内参照;采用双荧光素酶报告系统检测HIE-1转录活性.
结果:在正常氧状态下,bFGF诱导VEGF分泌,具有时间和剂量依赖性,并被MEK1激酶抑制剂(PD98059)和PI-3K激酶抑制剂(LY294002)所阻断.在低氧状态下,bFGF增强了低氧诱导VEGF分泌的效应,LY294002抑制低氧和低氧与bFGF协同诱导的VEGF分泌,PL98059则没有表现出任何作用.低氧诱导HIF-1α蛋白表达、增加HIF-1转录活性,bFGF增强了低氧的诱导效应.bFGF和部分低氧诱导的HIF-1α蛋白表达被LY294002抑制.此外,LY294002和PD98059还抑制bFGF诱导的HIF-1转录活性,但不影响低氧的诱导作用.HIF-1转录活性在Akt正显性构建体转染细胞中得到了增强,在负显性构建体转染细胞中得到了抑制.
结论:bFGF诱导T47D细胞分泌VEGF,并能增强低氧诱导的效应,PI-3K/Akt信号通路起主要的调节作用.低氧和bFGF诱导HIF-1活化,是VEGF分泌的主要转录激活因子.
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