人类新基因SZRD1(C1orf144)的功能研究

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研究背景:SUZ RNA binding domain containing 1(SZRD1 or C1orf144)是一个目前尚无任何功能报道的人类新基因,具有两个变异体,本文主要对SZRD1-v1的结构和功能进行了初步研究。研究目的 :鉴定人类新基因SZRD1-v1,对其生物学功能进行研究。研究方法 :通过生物信息学分析了该基因的染色体定位、进化的保守性和氨基酸的组成及结构特点。利用激光共聚焦扫描显微镜研究了SZRD1-v1在细胞内的定位。通过合成多肽,制备了多克隆抗体。构建SZRD1-v1真核表达质粒,利用Western blot的方法在Hela中验证了表达。设计合成si RNA,敲减了内源性的SZRD1。利用CCK8和流式细胞术检测了该基因在过表达和敲减后对细胞增殖、凋亡及细胞内ROS的影响。并利用Western blot检测了对相关信号通路的影响。通过构建SZRD1-v1不同的截短体来验证其功能结构域。研究结果 :SZRD1的染色体定位为1p36.13。在B淋巴母细胞中高表达,Signal P软件预测SZRD1编码的蛋白不含有潜在的信号肽切割位点。通过过表达和Western blot实验,证实该蛋白为非分泌蛋白。利用合成的多肽免疫家兔,制备了具有良好效价和特异识别抗SZRD1-v1的多抗。SZRD1-v1可以激活NF-κB和T-bet通路,其作用具有剂量依赖性。结构研究证明SZRD1-v1功能是通过SUZ结构域起作用的。功能实验证明,过表达SZRD1-v1,可以提高细胞内ROS水平,si RNA敲减后则可以显著降低ROS水平,表明其对胞内ROS有正向调节作用。并且证实SZRD1-v1对细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的效果。结论 :SZRD1是一个人类未知的新基因,对细胞有抑制增殖和诱导凋亡的效果,可以激活NF-KB和T-bet通路,对胞内ROS有正向调节作用。
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