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动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种严重危害人类健康的最常见的心脑血管慢性疾病之一,是冠心病、脑梗死、外周血管病的主要原因,已成为现代社会影响人类健康的最大杀手之一。其病因尚未完全确定,一般认为是多因素作用于不同环节所导致,主要的危险因素包括不可改变因素(如年龄、性别、遗传及环境等)及可改变因素(如血脂异常、高血压、吸烟、糖尿病、代谢综合征等)。对于本病的发病机制,有不同的学说,包括脂质浸润学说、氧化修饰蛋白学说,动脉SMC增殖或突变学说,单核巨噬细胞作用学说、内皮细胞损伤-反应学说、慢性炎症学说等。近年来认为慢性炎症学说中炎症反应的调节因子在动脉粥样硬化疾病的发生发展中发挥重要的作用。作为慢性炎症性疾病,慢性炎症因子刺激血管内皮细胞功能发生障碍,脂质进入动脉内膜并沉积在内膜下间隙,随后单核细胞与内皮细胞黏附,进入内膜,ox-LDL与巨噬细胞的清道夫受体结合被摄取,形成泡沫细胞;同时动脉中膜的血管平滑肌细胞迁移入内膜,摄取修饰的脂质转化为巨噬细胞进而形成泡沫细胞。病变主要累及大中型肌型动脉,常导致管腔闭塞或管壁破裂出血等严重后果。血小板衍生因子(Platelet derived growth factor,PDGF)作为一种化学趋化剂而影响细胞的增殖和迁移,近年研究发现跨膜蛋白98(transmembrane protein,TMEM98)与炎症发生发展密切相关。本研究旨在探讨TMEM98在PDGF诱导的血管内皮细胞HUVEC粘附和血管平滑肌细胞AOSMC增殖迁移中的作用及分子机制。方法:(1)构建AS小鼠模型,并用组织免疫荧光检测AS斑块中TMEM98的表达量,qP CR和细胞免疫荧光的方法检测PDGF刺激下HUVEC和AOSMC中TMEM98的表达情况;(2)设计并构建TMEM98的重组质粒(pc DNA-TMEM98)和siT MEM98,应用细胞粘附实验检测TMEM98对单核-内皮细胞粘附的影响,以及用qP CR的方法检测siT MEM98对内皮细胞粘附分子ICAM-1和VCAM-1表达的影响;(3)Boyden Chamber方法检测TMEM98对AOSMC迁移的影响;(4)用MTT和CCK-8检测TMEM98对AOSMC增殖的影响;(5)运用Western blot法检测TMEM98对AKT/GSK-3β/Cyclin D1信号通路及β-catenin分子的影响。结果:(1)在AS小鼠模型中,与对照组相比,组织免疫荧光结果显示TMEM98在AS斑块中表达明显升高,qP CR和细胞免疫荧光结果显示,PDGF刺激后,与对照组相比,HUVEC和AOSMC中TMEM98的表达量升高;(2)细胞粘附实验结果显示,与对照组相比,siT MEM98后粘附细胞数明显减少,而pcD NA-TMEM98后粘附细胞数明显增加,并且qP CR结果显示siT MEM98可以抑制ICAM-1和VCAM-1的表达;(3)Boyden Chamber、MTT和CCK-8实验结果显示,在PDGF刺激下,siT MEM98可以明显抑制AOSMC的增殖和迁移,而pcD NA-TMEM98可以明显促进其增殖;(4)Western blot结果显示,siT MEM98可以明显抑制与细胞增殖迁移密切相关的信号分子AKT和GSK-3β的磷酸化水平以及Cyclin D1和β-catenin分子的表达。结论:1.成功构建AS小鼠模型,PDGF可以诱导HUVEC和AOSMC中TMEM98的表达。2.TMEM98通过调控ICAM-1和VCAM-1的表达调节单核-内皮细胞的黏附。3.TMEM98通过调控AKT/GSK-3β/Cyclin D1信号通路及β-catenin分子调节AOSMC的增殖和迁移。