巢式PCR检测甘蔗宿根矮化病病原

来源 :中国植物病理学会2010年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fukuilover123
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由木质部限制性赖氏细菌木质部变种(Leifsonia xylisub sp.xyli,Lxx)引起的甘蔗宿根矮化病(Ratoon Stunting Disease,RSD)是世界甘蔗产区普遍发生的种苗传播病害,是导致宿根蔗产量低、品质差的主要原因之一,严重影响甘蔗产业可持续发展.种植健康种苗是防治该病害的有效措施,建立灵敏快速的病原检测方法是发展健康种苗的技术保障.本研究根据甘蔗宿根矮化病病原细菌Lxx的16S~23S核糖体DNA ITS区域设计合成3条特异引物F1、F2和R,F1/R作为第1轮扩增引物,F2/R作为第2轮扩增引物,提取样品总DNA,建立了检测Lxx的半巢式PCR体系,扩增片段约260bp.用该方法检测蔗茎、组培苗、田间植株感染Lxx的情况,效果良好.随机抽取两个扩增产物进行序列测定,测序结果显示扩增到的片段是Lxx部分序列,与己报道的澳大利亚LxxDNPRC108株系、LIA株系和巴西Lxx CTCB07株系(GenBank登录号分别为DQ232616、AF034641和AE016822)相应片段序列同源性100%,与美国路易斯安那州Lxx 16296株系(GenBank登录号AF056003)相应片段序列同源性99%.用建立的方法检测从广西各甘蔗主产区采集的不同品种甘蔗样品41份,有35份样品扩增到预期片段,Lxx检出率高达85.37%,表明田间甘蔗普遍感染Lxx,加强RSD的防治技术研究和相关措施落实是当务之急.该方法的建立可以为RSD抗病育种研究、健康种苗脱菌处理提供有效检测手段.
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