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目的:构建人β-神经生长因子(β-NGF)重组真核表达载体,在二氢叶酸还原酶(DHFR)缺陷的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中表达该基因,并对表达产物进行鉴定和生物活性分析。
方法:酶切Pcdna3.1-β-NGF获得β-NGF基因,将它连接到真核表达载体Pmd902中,将构建好的Pmd902-β-NGF经脂质体转染法导入到二氢叶酸还原酶缺陷型CHO细胞中,用撤除H、T(次黄嘌呤、胸腺嘧啶脱氧核苷)的方法进行筛选,并用ELISA对表达产物进行鉴定。利用鸡胚背根神经节法检测表达产物活性。
结果:重组载体经OCR鉴定、酶切、测序等分析,插入的基因片段为β-NGF的基因。转染β-NGF基因的细胞上清中可检到NGF蛋白。表达产物能够促进鸡胚背根神经节的生长。
结论:成功构建了β-NGF在CHO细胞中的稳定表达体系,转染β-NGF基因的CHO细胞所分泌的β-NGF蛋白具有较高的生物学活性,为进一步研究β-NGF的生物学功能、开展生物治疗和大规模生产重组人神经生长因子奠定了基础。