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研究背景和目的:急性肝功能衰竭(Acute Liver Failure,ALF)是一种短期内大量肝细胞坏死以及剧烈肝功能丧失为特点的临床重症。以D-氨基半乳糖诱导的小鼠急性肝损伤为疾病模型,研究间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)治疗急性肝功能衰竭的机制。材料与方法:以0.6g/kgD-氨基半乳糖腹腔注射构建小鼠的ALF模型,分离培养C57BL/6小鼠的骨髓MSCs并进行表型鉴定。液相蛋白芯片的构建并检测MSCs条件培养基细胞因子成分和MSCs移植后ALF小鼠血清中炎性因子水平。设计与合成IL-10siRNA和IL-4siRNA慢病毒载体侵染MSCs使其不表达IL-10及IL-4。24只小鼠随机分为4组,A组:正常对照组(n=6);B组:ALF组(n=6);C组:ALF+重组小鼠IL-10组(n=6);D组:ALF+MSCs+抗IL-10组,验证MSCs通过IL-10治疗ALF。用IL-10gene-silencedMSCs、缺乏T细胞的Rag2-/-小鼠、氯膦酸盐脂质体耗竭体小鼠内巨噬细胞等方法验证巨噬细胞是体内IL-10的主要来源。体外在D-氨基半乳糖诱导损伤条件下将MSCs与巨噬细胞直接或间接共培养验证MSCs通过旁分泌机制作用于巨噬细胞,将24只小鼠随机分为4组,A组:MSCs单培养组(n=6);B组:巨噬细胞单培养组(n=6);C组:MSCs+巨噬细胞共培养组(n=6);D组:IL-4gene-silencedMSCs+巨噬细胞共培养组(n=6)。每组小鼠行干预后检测肝功能、观察病理切片、检测肝细胞增殖和凋亡以及计算生存期。结果:分离获取的MSCs表达CD45阴性,CD44、CD90、CD29阳性。MSCs移植后肝功能指标ALT、AST明显下降,凋亡的肝细胞数量减少,KI67阳染的细胞增加。促炎因子TNF-α、IL-6等表达下降,抗炎因子尤其是IL-10的表达显著增加,阻断IL-10后MSCs对ALF的保护作用被削弱。TransWell实验验证MSCs通过旁分泌机制作用于巨噬细胞,而使用IL-4gene-silenced MSCs或阻断巨噬细胞表面的IL-4受体后,MSCs的治疗作用减弱,表明IL-4在MSCs旁分泌机制中发挥着重要作用。结论:骨髓MSCs可以通过旁分泌IL-4强化巨噬细胞产生IL-10治疗急性肝功能衰竭。