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禽流感病毒亚型众多,HA与NA基因的组合更加频繁,而HA与NA的合理适配可能是该病毒成为流行株的重要原因之一,但相关研究仍不清晰。本研究选取以H5亚型禽流感病毒Clade 2.3.4代表株SY和Clade 2.3.4.4代表株JY的HA基因分别与3种不同亚型的N1、N2和N8基因组合,应用反向遗传技术,以SY株作为内部骨架,构建了一系列重组病毒并对其生物学特性和致病性进行评价。受体结合试验发现,含SY HA的各重组病毒,均只有α2,3唾液酸受体结合特性,与母本病毒SY株一致。而含JY HA的重组病毒中,仅有JY-SY与母本JY株一致,具有α2,3和α2,6唾液酸双受体结合特性。NA活性和红细胞解凝能力测定显示,N1和N8的活性和解凝能力显著高于N2。运用流式细胞检测CEF细胞中HA蛋白表达情况发现,当病毒含SY HA时,H5N1亚型病毒HA蛋白表达量较高,当病毒含JY HA时,H5N2亚型病毒HA蛋白表达量较高,而H5N8亚型病毒HA蛋白表达量则相对较低。此外NP、M蛋白的表达情况与HA一致。鸡的致病性试验显示,含SY HA病毒的毒力要高于含JY HA病毒,且在所有含有SY HA的病毒中,各毒株的毒力无显著差异。但换成JY HA时,H5N2和H5N8亚型病毒的毒力高于H5N1亚型病毒毒力。小鼠致病性试验也表明,含SY HA病毒的毒力高于含JY HA病毒。因此,H5亚型禽流感病毒的HA和NA基因具有一定适配性,这种特性可以影响病毒的生物学特性和致病力。