紫杉醇是从红豆杉属植物树皮中提取分离出来的一种次生代谢物,具有显著抗癌效果,是目前应用最广泛的天然抗癌药物之一。但因资源匮乏,单纯从含量甚微的天然红豆杉植物中提取紫杉醇无法满足临床需求,故紫杉醇的药源问题己引起人们的极大关注。代谢工程利用分子生物学手段对已知细胞代谢途径进行改造以积累目的产物,引起了世界各国科学家的广泛关注。灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)是典型的模式真菌,它具有天然的萜类化合物及其衍生物。而其全基因组的测序更表明它拥有萜类化合物生物合成的大量关键酶基因。本研究以香菇gpd-Les启动子分别与ggpps((?)牛儿基焦磷酸合酶基因)、ts(紫杉烯合酶基因)、t5aOH(紫杉烯5α-羟基化酶基因)连接构建表达载体,三个表达载体经过PCR鉴定,酶切鉴定,测序鉴定,分别命名为pgLes-ggpps、pgLes-ts,pgLes-t5aOH。采用PEG介导原生质体法分别将这3个表达载体与辅助质粒pCc1001(含有trp1基因)共转化色氨酸营养缺陷型的灰盖鬼伞原生质体中。经过选择培养基筛选,PCR和RT-PCR鉴定,结果表明了目的基因已整合进灰盖鬼伞的基因组中,并能正常转录。