【摘 要】
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谷胱甘肽过氧化物酶(EC 1.11.1.9,GPX)是抗氧化酶系的重要一员,为了实现单链抗体的可溶性表达以制备GPX模拟酶,把具有GPX底物结合位点的单链抗体表达载体pTMF-2F3上去除了原2F3基因N端非必需的18个氨基酸,采用新的表达载体pPelB质粒,在目的基因N端引入13个氨基酸的前导肽,转入BL21(lys S)中,使其分泌到大肠杆菌的周质腔中得以表达,获得了可溶性表达产物.产物经过分
【机 构】
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吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室(长春)
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谷胱甘肽过氧化物酶(EC 1.11.1.9,GPX)是抗氧化酶系的重要一员,为了实现单链抗体的可溶性表达以制备GPX模拟酶,把具有GPX底物结合位点的单链抗体表达载体pTMF-2F3上去除了原2F3基因N端非必需的18个氨基酸,采用新的表达载体pPelB质粒,在目的基因N端引入13个氨基酸的前导肽,转入BL21(lys S)中,使其分泌到大肠杆菌的周质腔中得以表达,获得了可溶性表达产物.产物经过分离纯化、Western Blot印迹和硒化测活确定为具有GPX活性的鼠单链抗体,其GPX活力为11500U/μmol.通过脂质过氧化、细胞存活率和细胞膜通透性实验研究表明,具有GPX活性的单链抗体对大鼠乳鼠心肌细胞有抗氧化损伤的作用,是膜脂质过氧化的有效抑制剂.
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