Tat修饰的明胶-硅氧烷纳米粒介导CGRP基因体外转染人脑微血管内皮细胞

来源 :第16届中南六省(区)神经外科学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tta86
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  目的:探讨Tat修饰的明胶-硅氧烷纳米粒(gelatin–siloxanenanoparticles,GSNPs)载体携带大鼠降钙素基因相关肽(calcitoningene-relatedpeptide,CGRP)基因转染人脑微血管内皮细胞hCMEC/D3的可行性.方法:自制GSNPs并用Tat多肽修饰,与重组质粒pLXSN-CGRP结合,凝胶电泳检测纳米粒子对质粒的包封能力.用携带pLXSN-CGRP的纳米粒子转染hCMEC/D3细胞,流式细胞仪定量检测细胞内吞率,ELISA法测定细胞培养液中的CGRP蛋白分泌量和持续时间.结果:成功制备出Tat修饰的GSNPs和重组质粒pLXSN-CGRP,凝胶电泳实验表明了GSNPs和Tat-GSNPs对质粒pLXSN-CGRP的完全包封.流式细胞仪检测GSNPs和Tat-GSNPs载运质粒pLXSN-CGRP跨膜进入hCMEC/D3细胞内吞率分别为(62.97±4.54)%和(65.60±5.14)%,二者无统计学差异(P>0.05).ELISA检测结果显示转染hCMEC/D3细胞第3天,Tat-GSNPs/pLXSN-CGRP组的CGRP蛋白表达量最高,显著高于裸质粒组和GSNPs/pLXSN-CGRP组.其动态检测结果显示,在2~6天时蛋白表达明显,第4天时达到最高值,随后逐渐下降.结论Tat修饰的明胶-硅氧烷纳米载体可以有效地介导CGRP基因转染hCMEC/D3细胞且实现稳定表达,为基因治疗蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的后续研究提供了实验基础.
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