宫颈癌患者Treg细胞及其Foxp3基因启动子区甲基化水平的研究

来源 :2015中国医师协会妇产科医师大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dd398622409xiewenjin
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  目的:探讨宫颈肿瘤患者体内Treg细胞功能表达以及生物学特点.方法:早期宫颈癌患者25例,宫颈鳞状上皮内高度病变(HSIL)患者20例,健康志愿者10例.分别于术前、术后不同时期抽取静脉血.分离人外周血单个核细胞(PBMC);流式细胞仪检测CD4+CD25+ Foxp3 +Treg细胞;磁珠分选CD4+CD25+Treg细胞;ELISA试剂盒检测TGF-β、IL-10的含量;亚硫酸氢钠修饰的甲基化测序技术对宫颈癌患者Treg细胞Foxp3基因启动子区CpG位点进行甲基化检测及测序;RT-PCR技术检测Treg细胞内甲基化转移酶(DNMTs)的表达.结果:1、宫颈癌及HSIL患者分别与对照组比较,外周血中CD4+CD25+Treg/CD4+T及CD4+CD25+ Foxp3 +Treg/CD4+细胞比例均呈显著增加(P<0.05);术后1周,CD4+CD25+Treg/CD4+T细胞比例无明显变化,而CD4+CD25+ Foxp3+Treg/CD4+细胞比例却出现显著降低(P<0.05);术后1个月与术后1周比较,CD4+CD25+Treg/CD4+T比例出现了明显下降(P<0.05),而CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+细胞比例较术后1周却无明显变化;HSIL与宫颈癌患者之间比较始终无明显统计学差异;2、Treg细胞相关免疫细胞因子TGF-β、IL-10在宫颈癌及HSIL患者血清中表达水平较对照组显著升高(P<0.05),术后1周及术后1月,其表达水平又出现显著性降低(P<0.05);其表达水平与外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的数量变化呈正相关(P<0.05);而与CD4+CD25+Treg细胞的数量变化却未见明显相关;3、对宫颈癌及HSIL患者外周血CD4+CD25+Treg细胞Foxp3基因启动子区(-204~+12bp)8个CpG位点进行焦硫酸测序发现,其Foxp3基因启动子区(-138,-77,-65)CpG位点甲基化水平较对照组显著升高(P<0.05);DNA甲基化转移酶(DNMT1、DNMT3a) mRNA表达水平亦较对照组明显升高(P<0.05);而术后一个月,DNMT1、DNMT3a表达水平呈显著下降,较对照组比较无统计学差异.宫颈癌和HSIL患者无论是在甲基化位点、表达水平,还是在甲基化转移酶表达水平方面均无显著性差异.
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