表达大肠杆菌黏附素的重组乳酸菌注射接种断奶仔猪的试验研究

来源 :中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十一次全国动物营养学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hulin99
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  菌毛黏附素是产肠毒素大肠埃希氏菌(enterotoxigenic Escherichia coli, ETEC)感染仔猪并导致其腹泻的重要致病因子,研究表明口服免疫F4菌毛或菌毛黏附素主要蛋白亚基FaeG可诱导仔猪产生特异性免疫应答.安全级乳酸乳球菌(L lactis)被认为是表达外源抗原的理想候选菌株,本实验室采用L.lactis构建了表达FaeG的重组菌L.lactis NZ9000(pNZ8148-faeG),已证明皮下接种重组菌可诱导小鼠产生特异性系统免疫反应.仔猪是F4 ETEC最终宿主和易感动物,故在小鼠免疫试验取得成功的基础上,进一步研究肌肉注射重组L.lactis是否能诱导仔猪产生特异性免疫应答,为重组L.lactis表达外源抗原应用于仔猪试验研究提供参考资料.选择体重相近、血清抗F4菌毛抗体水平与新生仔猪相近的6周龄杜×长×大哺乳仔猪21头,随机分成3组,即对照组Ⅰ (PBS)、对照组Ⅱ[L.lactis NZ9000(pNZ8148)]、试验组Ⅲ[重组菌L lactis NZ9000(pNZ8148-faeG)免疫],上述各供试物质与弗氏完全佐剂/弗氏不完全佐剂等体积混合,于试验第0天和第15天进行肌肉注射接种.于0dppi、7dppi、14dppi、21dppi、28dppi、35dppi、42dppi(初次免疫后天数)颈静脉采血,分离血清,以1∶20、1∶60和1∶160稀释,间接ELISA法检测血清中抗F4菌毛特异性IgA、IgM和IgG.在50 dppi,每组随机取3只仔猪屠宰,取十二指肠、空肠和回肠制备肠黏膜浸提物,1∶20稀释,间接ELISA法检测肠道黏膜组织中特异性IgA和IgM.结果显示:肌内注射免疫重组L.lactis可诱导仔猪产生特异性血清IgG、IgA和IgM.在21dppi、28dppi、35dppi和42dppi,血清特异性IgG抗体水极显著高于载体对照组(P<0.01),在21dppi和28dppi,血清中特异性IgA抗体水平显著高于载体对照组(P<0.05),到35dppi时,血清特异性IgM抗体水平显著高于载体对照组(P<0.05).重组L.lactis免疫组仔猪空肠和回肠组织黏膜中特异性IgA抗体水平均高于载体对照组,但差异不显著(P>0.05);空肠组织黏膜中特异性IgM抗体水平高于载体对照组,但差异不显著(P>0.05).结果提示,肌肉注射免疫L.lactis NZ9000(pNZ8148-faeG)能够诱导仔猪产生特异性免疫反应,并以系统免疫反应为主.本研究为通过注射途径预防仔猪ETEC感染,以及重组L.lactis疫苗的研究提供了参考资料.
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