【摘 要】
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目的：探讨微小RNA-29c（microRNA-29c,miR-29c）对肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）诱导小鼠海马神经元HT22细胞损伤效应的影响及机制。方法：构建慢病毒（lentivirus,LV）介导的过表达/低表达miR-29c的小鼠海马神经元HT22，分为空载体细胞株（LV-vector）组、LV-vector+TNF-α组、miR-29c过
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（No.31860291）； 贵州省教育厅创新群体重大研究项目（黔教合KY字[2018]025）；
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目的：探讨微小RNA-29c（microRNA-29c,miR-29c）对肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）诱导小鼠海马神经元HT22细胞损伤效应的影响及机制。方法：构建慢病毒（lentivirus,LV）介导的过表达/低表达miR-29c的小鼠海马神经元HT22，分为空载体细胞株（LV-vector）组、LV-vector+TNF-α组、miR-29c过表达细胞株（LV-miR-29c）+TNF-α组和miR-29c低表达细胞株（LV-miR-29c sponge）+TNF-α组。采用CCK-8法和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）释放实验评价TNF-α对HT22细胞的毒性作用；免疫荧光染色观察肿瘤坏死因子受体1（tumor necrosis factor receptor 1,TNFR1）的表达；RT-qPCR检测miR-29c和TNFR1 mRNA的表达；Western blot检测TNFR1、TNFR相关死亡域蛋白（TNFR-associated death domain protein,TRADD）、Fas相关死亡结构域蛋白（Fasassociated death domain protein,FADD）、pro-caspase-8、cleaved caspase-8、pro-caspase-3和cleaved caspase-3的蛋白水平；Hoechst和TUNEL染色检测细胞凋亡率。结果：（1）CCK-8和LDH释放实验结果显示，与LV-vector组相比，LVvector+TNF-α组细胞活力显著下降（P＜0.05），且LDH释放显著增多（P＜0.05）；与LV-vector+TNF-α组相比，LV-miR-29c+TNF-α组细胞活力显著上升（P＜0.05），且LDH释放显著减少（P＜0.05），而LV-miR-29c sponge+TNF-α组细胞活力显著下降（P＜0.05），且LDH释放显著增多（P＜0.05）。（2）RT-qPCR和免疫荧光结果显示，与LV-vector组相比，LVvector+TNF-α组TNFR1表达显著增多（P＜0.05）；与LV-vector+TNF-α组相比，LV-miR-29c+TNF-α组TNFR1表达显著减少（P＜0.05），而LV-miR-29c sponge+TNF-α组TNFR1表达显著增多（P＜0.05）。（3）Western blot结果显示，与LVvector组相比，LV-vector+TNF-α组细胞中TNFR1、TRADD、FADD、cleaved caspase-8和cleaved caspase-3蛋白水平显著上调（P＜0.05）；与LV-vector+TNF-α组相比，LV-miR-29c+TNF-α组TNFR1、TRADD、FADD、cleaved caspase-8和cleaved caspase-3蛋白水平表达显著下调（P＜0.05），而LV-miR-29c sponge+TNF-α组TNFR1、TRADD、FADD、cleaved caspase-8和cleaved caspase-3蛋白水平显著上调（P＜0.05）。（4）Hoechst和TUNEL染色结果显示，与LV-vector组相比，LV-vector+TNF-α组凋亡细胞数目显著增加（P＜0.05）；与LV-vector+TNF-α组相比，LV-miR-29c+TNF-α组凋亡细胞数目显著减少（P＜0.05），而LV-miR-29c+sponge+TNF-α组凋亡细胞数显著增加（P＜0.05）。结论：miR-29c减轻TNF-α诱导的小鼠海马神经元HT22细胞损伤，其机制可能与抑制TNFR1信号通路激活导致的细胞凋亡有关。
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