【摘 要】
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为制备抗猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用原核表达系统表达重组N蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,通过
【机 构】
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吉林农业大学动物科学学院,吉林长春,130118中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨,150001;
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为制备抗猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用原核表达系统表达重组N蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,通过间接ELISA方法筛选阳性克隆,经4次细胞克隆纯化后,获得两株稳定分泌抗重组TGEV N蛋白的MAb,命名为3D7和5E8.通过western blot和间接免疫荧光试验对MAb的免疫活性和特异性进行鉴定,结果表明两株MAb均能够与TGEV全病毒反应并且特异性良好.利用合成的多肽对N蛋白抗原表位进行鉴定,初步确定MAb3D7识别的表位为241AGKGDVTRFYGARSS SANFG260;5E8为184KKDD SVEQAVLAALKKLGV203.本研究制备了两株MAb并对其表位进行鉴定,为TGEV检测方法的建立和N蛋白功能的分析奠定了基础.
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