【摘 要】
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目的 分析微液滴数字PCR（dropletdigitalPCR，ddPCR）对新型冠状病毒（severeacuterespiratorysyndromecoronavirus-2，SARS-CoV-2）的核酸检测结果，并与实时荧光定量RT-PCR（Real-timefluorescencequantitativeRT-PCR，qRT-PCR）检测结果相比较，评价检测优缺点，为优化新型冠状病毒的核酸
【基金项目】
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重庆市科卫联合医学科研项目（No.2020FYYX080，No.2020FYYX120）；
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目的 分析微液滴数字PCR（dropletdigitalPCR，ddPCR）对新型冠状病毒（severeacuterespiratorysyndromecoronavirus-2，SARS-CoV-2）的核酸检测结果，并与实时荧光定量RT-PCR（Real-timefluorescencequantitativeRT-PCR，qRT-PCR）检测结果相比较，评价检测优缺点，为优化新型冠状病毒的核酸检测方案提供数据支持。方法根据中国疾病预防控制中心公布的SARS-CoV-2特异性引物探针，设计针对SARS-CoV-2 的ddPCR检测方法，选取1份样本梯度稀释后进行灵敏度试验；选取季节性H3N2流感病毒等6种呼吸道病毒核酸阳性的样本与SARS-CoV-2阳性样本进行特异性试验；选取5份SARS-CoV-2阳性样本进行重复性试验；并选取SARS-CoV-2阳性30份、阴性20份样本进行多临床样本检测，与qRT-PCR检测结果进行分析比较。结果 ddPCR法能特异检出SARS-CoV-2，并直接得到样本靶基因的原始拷贝数，实现精准定量；对梯度稀释阳性样本灵敏度检测显示，qRT-PCR在样本10-5稀释度部分检出靶基因，10-6稀释度未检出靶基因，而ddPCR在样本10-5、10-6稀释度均全部检出靶基因，ddPCR的检测下限相对qRT-PCR结果有2个数量级的提升，灵敏度高于qRT-PCR；两种方法重复性实验结果比对中，ddPCR变异系数在1.266%～11.814%之间，低于qRT-PCR的1.729%～26.174%，重复性高于qRT-PCR；对50份临床样本检测比较中，30份新型冠状病毒肺炎（CoronavirusDisease2019，COVID-19）确诊病例阳性样本，两种方法均能成功检出SARS-CoV-2，20份COVID-19阴性样本经两种方法检测，结果均为阴性，检测结果符合率为100.00%（50/50）。结论ddPCR法对SARS-CoV-2能精准定量，特异性强，且灵敏度和重复性均高于qRT-PCR，但也存在一定检测局限性，更适合低载量样本的检测。在实际检测中，可将两种方法合理结合，提高检测准确性。
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