【摘 要】
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目的 繁育和鉴定调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)中条件性Notch2基因敲除小鼠,为Notch2在Treg中的功能提供研究工具;为Treg与免疫性疾病的发病关系及靶向治疗提供研究手段.方法 将引进的Notch2flox/flox小鼠和Foxp3-Cre+小鼠进行饲养和杂交;将繁育得到的第一代小鼠进行相互交配,再得到第二代小鼠.通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)鉴定出具有Notch2flox/flox Foxp3-Cre+基因型的小鼠
【机 构】
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430060 湖北武汉,武汉大学人民医院耳鼻咽喉头颈外科;中部战区总医院耳鼻咽喉头颈外科
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目的 繁育和鉴定调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)中条件性Notch2基因敲除小鼠,为Notch2在Treg中的功能提供研究工具;为Treg与免疫性疾病的发病关系及靶向治疗提供研究手段.方法 将引进的Notch2flox/flox小鼠和Foxp3-Cre+小鼠进行饲养和杂交;将繁育得到的第一代小鼠进行相互交配,再得到第二代小鼠.通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)鉴定出具有Notch2flox/flox Foxp3-Cre+基因型的小鼠,再通过该小鼠进行繁育.通过流式细胞术分选出野生型小鼠和Notch2flox/flox Foxp3-Cre+小鼠体内的Treg,Western blot检测小鼠Treg中Foxp3、Notch2、NICD2蛋白的表达,苏木精-伊红(hemotoxylin-eosin,HE)染色观察小鼠肺脏等器官的形态学变化.结果 该方法成功构建了在Treg中敲除Notch2基因的小鼠.Western blot结果显示Notch2flox/flox Foxp3-Cre+小鼠体内的Treg中Notch2、NICD2、Foxp3蛋白表达明显下降(P<0.05),HE染色显示该小鼠肺脏等器官出现明显炎症细胞浸润.结论 本研究成功构建了Treg中条件性敲除Notch2基因的实验小鼠,为Treg与免疫性疾病的发病和靶向干预研究奠定了基础.
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