SIRT1在单纯性肥胖症患者中的表达意义及加味二陈汤干预的实验研究

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目的探究SIRT1在单纯性肥胖症患者血清中的表达意义及加味二陈汤调控SIRT1/NF-κB p65信号通路对肥胖C57BL/6J小鼠脂肪组织的作用机制。挖掘中药治疗单纯性肥胖症的核心思路,为本病的临床选方用药提供参考及理论支撑。方法1、数据挖掘技术采用数据挖掘技术对近二十年关于中药方治疗单纯性肥胖症的临床文献进行筛选。运用SPSS Modeler 18.0及SPSS 24.0统计软件对高频药物进行关联规则和聚类分析,总结中药方治疗单纯性肥胖症的用药规律。2、meta分析根据数据挖掘技术结果得出单纯性肥胖症的核心治法,对近二十年核心治法中药方治疗单纯性肥胖症的临床研究文献进行筛选,纳入标准的文献,采用RevMan 5.4软件对各项结局指标进行分析。3、临床部分本部分实验选取180例就诊患者,对单纯性肥胖症及正常受试者血清SIRT1、BMI、腰围、血脂水平等指标进行采集。通过多角度分析,初步探讨SIRT1在单纯性肥胖症患者中表达意义。4、动物实验将造模成功后的小鼠分为模型组、中药组、中药+抑制剂组、激动剂组,同时设置空白组。空白组给予普通饲料喂养;模型组给予高脂饲料喂养;中药组给予高脂饲料喂养,加味二陈汤每日灌胃一次,每周5次。中药+抑制剂组给予高脂饲料喂养,加味二陈汤每日灌胃一次,SIRT1抑制剂尾静脉注射,每周3次。激动剂组给予高脂饲料喂养,激动剂采用白藜芦醇灌胃给药,每周3次。干预8周后,将各组小鼠处死,对组织标本进行采集及检测。研究结果1、经过筛选,最终纳入文献216篇,246味中药。高频用药前五位为茯苓、白术、陈皮、半夏、山楂。高频用药类别前五位为利水渗湿药、理气药、补益药、燥湿药、清热药。药物四气频次占比由高到低为温、寒、平、凉、热。药物五味频次占比由高到低甘、苦、辛、酸、涩、咸。药物归经前三位为胃经、脾经、肺经。关联规制结果显示,白术→茯苓为常用药对;药物组合多补益药与理气药组合、燥湿化痰药与理气药组合。聚类分析最终得到5个类别。2、经过筛选,最终纳入22篇RCT文献,共1829例患者。meta分析结果显示:健脾化痰中药方组临床有效率、BMI、体重、腰围、臀围、腹围、腰臀比均优于其他疗法组。3、临床部分对照组与病例组的性别、吸烟史、饮酒史、饮食情况、体育锻炼情况、睡眠情况等比较,差异无统计学意义(P>0.05)。BMI、腰围、臀围、腰围比(WHR)、TNF-α、SIRT1、NF-κB等比较,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组血清SIRT1水平高于病例组血清SIRT1水平(P<0.05);对照组血清NF-κB水平低于对照组血清NF-κB水平(P<0.05);对照组血清TNF-α水平低于病例组血清TNF-α水平(P<0.05)。SIRT1水平与NF-κB、BMI、腰围、臀围、腰臀比、HDL-C、TNF-α呈负相关;与TC、LDL-C呈正相关。SIRT1与单纯性肥胖症呈负相关,NF-κB、TNF-α与单纯性肥胖症呈正相关。NF-κB、TNF-α,SIRT1与NF-κB、TNF-α对单纯性肥胖症均存在交互作用。4、动物实验实验一:结果显示:经过8周造模,两组体重比较,差异有显著统计学意义(P<0.01)。干预后,模型组体重、脂肪重量、体脂指数大于空白组(P<0.05);与模型组相比,中药汤组体重、脂肪重量、体脂指数更低(P<0.05),中药+抑制剂组,差异无统计学意义(P>0.05),激动剂组对肥胖小鼠脂肪重量、体脂指数的改善程度更高(P<0.05)。实验二:空白组脂肪组织形态正常,细胞体积较小;与空白组比较,模型组视野内脂肪细胞体积明显增大,细胞数目减少;中药组脂肪细胞体积较模型组明显减小,视野内细胞数目明显增多;中药加抑制剂组,脂肪细胞形态、体积、数量均变化不明显;激动剂组视野内脂肪细胞体积明显减小,细胞数目明显增多。与空白组比较,模型组小鼠TC、TG、LDL-C水平升高,HDL-C水平降低。加味二陈汤干预后,TC、TG、LDL-C水平均下降、HDL-C水平升高(P<0.05);与模型组比较,激动剂组小鼠血脂水平亦降低(P<0.05),中药加抑制剂组能改善肥胖小鼠的TC、TG水平(P<0.05)。实验三:与空白组比较,模型组CD86巨噬细胞IDO值、M1/M2值升高、CD206巨噬细胞IDO值降低(P<0.05);与模型组比较,中药组CD86巨噬细胞IDO值、M1/M2值降低,CD206巨噬细胞IDO值增多(P<0.05);中药+抑制剂组CD86巨噬细胞、CD206巨噬细胞IDO值、M1/M2值差异无统计学意义(P>0.05):激动剂组CD86巨噬细胞IDO值、M1/M2值降低,CD206巨噬细胞IDO值增多(P<0.05)。实验四:与空白组比较,模型组小鼠血清TNF-α、IL-6、SFRP5含量差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,中药组TNF-α、IL-6、SFRP5有不同程度的改变(P<0.05);中药加抑制剂组TNF-α、SFRP5、IL-6水平无明显变化(P>0.05),激动剂组TNF-α、IL-6、SFRP5水平均发生变化(P<0.05)。与空白组比较,模型组 NF-κB、NF-κB p65、p-IκBα、TNF-α、IL-6蛋白及相应基因表达量增加(P<0.05)、SFPR5蛋白及相应基因表达量下降(P<0.05)。与模型组比较,中药组NF-κB、NF-κB p65、p-IκBα、TNF-α、IL-6蛋白及相应基因表达量下降,SFPR5蛋白及相应基因增加(P<0.05)。与模型组相比,激动剂组 NF-κB、NF-κB p65、p-IκBα、TNF-α、IL-6蛋白及相应基因表达量下降,SFPR5蛋白及相应基因增加(P<0.05)。中药+抑制剂组 NF-κB、NF-κB p65、p-IκBα、TNF-α、IL-6,SFPR5 蛋白及相应基因与模型组比较差异无统计学意义(P<0.05)。实验五:与空白组比较,模型组脂肪组织中SIRT1蛋白及相应基因表达降低、SIRT1的荧光强度更低、NF-κB p65的荧光强度升高(P<0.05)、SIRT1/NF-κB p65比值降低(P<0.05);与模型组比较,中药组脂肪组织中SIRT1蛋白表达及相应基因增加、SIRT1的荧光强度提高、NF-κB p65的荧光强度降低、SIRT1/NF-κB p65比值升高(P<0.05);与模型组相比,中药加抑制剂组的SIRT1蛋白及相应基因表达、SIRT1和NF-κB p65荧光强度差异无统计学意义(P>0.05)、SIRT1/NF-κB p65比值变化无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,激动剂组的SIRT1蛋白及相应基因表达、SIRT1的荧光强度增加、NF-κB p65的荧光强度降低、SIRT1/NF-κB p65比值升高(P<0.05)。结论1、当代医家对单纯性肥胖症的治疗以健脾化痰为核心治法,兼顾活血、消食、清热、泻下等药物。2、健脾化痰中药方治疗单纯性肥胖症疗效显著,值得临床推广。3、单纯性肥胖症患者血清SIRT1水平低于正常人群血清水平;单纯性肥胖症患者血清NF-κB、TNF-α水平高于正常人群血清水平;血清SIRT1水平与单纯性肥胖症发病呈负相关,血清NF-κB、TNF-α水平与单纯性肥胖症的发病呈正相关;SIRT1与NF-κB、TNF-α对单纯性肥胖症存在交互作用。4、加味二陈汤能改善肥胖小鼠的肥胖度、抑制脂肪细胞过度扩增,其效应可能是通过激活SIRT1,抑制NF-κB p65核转运,降低下游炎症因子水平表达实现的。
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