生长素抑制鲜切马铃薯褐变的研究

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我国鲜切马铃薯市场需求巨大,褐变是影响其品质和货架期的主要因素。研发安全、有效、使用简便的褐变抑制剂是鲜切马铃薯加工保鲜中亟待解决的问题。本研究对鲜切后褐变程度存在显著差异的克新4号和克新13号马铃薯进行了转录组学测序分析(RNA-Seq),并测定了生长素信号途径相关基因的表达量以及克新4号和克新13号马铃薯切后内源生长素含量的变化,初步揭示了内源生长素信号参与调控鲜切马铃薯褐变的机制;随后以山东省主栽马铃薯品种荷兰15号为实验材料,筛选了外源生长素处理抑制鲜切马铃薯褐变的最佳条件,并通过测定褐变关键酶活性、褐变底物以及抗氧化能力等初步探究了外源生长素处理抑制鲜切马铃薯褐变的作用机理。具体研究结果如下:(1)通过对两个马铃薯品种(克新4号和克新13号)鲜切后的褐变程度观察发现,克新4号马铃薯切后8 h已发生显著褐变,克新13号马铃薯切后1 d仍保持良好的色泽,可见克新4号马铃薯更易发生褐变。通过测定克新4号和克新13号马铃薯的块茎样品,从转录组学的角度分析抑制鲜切马铃薯褐变的机理。筛选得到121个差异基因,对这些差异基因进行GO富集分析,筛选出了6条显著性富集的代谢通路,“激素响应”通路属于富集最显著的三条通路之一,从中挑选差异表达倍数最高的生长素响应基因St RES作为后续研究对象。此外,利用实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative polymerase chain reaction,Real-time PCR)技术检测马铃薯生长素合成基因St SYN1-8以及生长素响应基因St RES的表达量,发现切后3 d,与克新4号马铃薯相比,克新13号马铃薯St SYN1、St SYN2、St RES基因表达显著上调,其中St SYN1表达上调倍数高达277,St RES表达上调倍数高达17,而St SYN3、St SYN4、St SYN5、St SYN6、St SYN7、St SYN8基因表达显著下调。推测St SYN1、St SYN2和St RES基因可能参与调控了鲜切马铃薯的褐变。(2)通过测定克新4号和克新13号马铃薯切后内源生长素含量,发现二者生长素含量均升高,但褐变较慢的克新13号马铃薯生长素含量升高更快。利用生长素合成抑制剂抑制克新4号马铃薯内源生长素的合成后,其褐变加重。以上说明内源生长素的合成可能参与调控鲜切马铃薯的褐变。转录组学分析、Real-time PCR以及内源生长素含量测定等实验结果表明:内源生长素信号可能通过调控生长素合成基因St SYN1、St SYN2和生长素响应基因St RES的表达进而参与调控鲜切马铃薯的褐变;外源生长素处理有可能抑制鲜切马铃薯褐变。(3)适宜浓度的外源生长素处理可以显著抑制鲜切马铃薯和马铃薯浆液的褐变。最佳处理条件是:5 mg/L,浸泡40 s,浸泡后放置48 h再鲜切。4℃贮藏条件下,与对照和水处理相比,外源生长素处理能使鲜切马铃薯的褐变延缓10 h左右。室温下,对照和水处理的马铃薯浆液20 min发生褐变,经外源生长素处理的马铃薯浆液40 min才开始褐变。通过生理指标测定,进一步发现外源生长素处理可以显著抑制马铃薯多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)活性、降低酪氨酸和总酚含量、提高2,2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)自由基抑制率。但生长素主要是通过影响PPO活性、酪氨酸含量、总酚含量和ABTS自由基抑制率中的哪一方面来抑制马铃薯褐变仍需进一步验证。
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