点扩散函数工程及其在高/超分辨显微成像的应用研究

来源 :中国科学技术大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:itour123
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生命科学与生物医学的发展对光学显微成像有了越来越高的要求,但光学系统的成像性能一直受限于阿贝衍射极限。虽然近数十年,科研工作者发展出各种超分辨显微成像技术以适应不同应用场景的需求,但是已有的光学显微成像技术尚存在许多不足。在高/超分辨光学显微镜中,点扩散函数直接反映了光学显微技术的分辨率,通过对点扩散函数进行调制整型,为实现高/超分辨显微成像提供了一种较为直接的、有效的技术手段。本论文基于点扩散函数调制整型对提高光学显微系统的三维分辨率并最终打破远场光学衍射极限限制进行了研究,提出了一些光学高/超分辨显微技术的新方法和新理论,实现了高/超分辨显微成像和大轴向单分子定位。本文的主要研究内容包括:1、基于矢量衍射积分建立了点扫描成像系统的照明点扩散函数和探测点扩散函数的计算模型,为研究基于点扩散函数工程调制整型技术提高光学显微成像的性能提供了理论基础和分析工具。提出的点扩散函数差分相干高分辨成像技术,使点扫描共聚焦成像的轴向分辨率提高为宽场成像的5倍,横向分辨率提高为宽场成像的1.7倍,并搭建了相关的实验系统,通过对纳米微球和细胞微光成像验证了仿真计算的结果。2、针对结构光照明系统的复杂性和超分辨图像重建所需的顺序照明模式可能存在的相位误差,我们提出了基于傅里叶叠层重建的点扫描虚拟结构探测显微技术(Theta-FP-vPSM)。采用虚拟结构探测技术,将光学系统采集到的原始数据与数字调制函数相乘得到结构条纹调制后的图像,经傅里叶叠层算法(Theta-FP)得到高频信息进而重建出超分辨图像。数字调制函数可根据需求设计,更加灵活,精度更高。此外,Theta-FP-vPSM成像技术兼具了传统SIM超分辨的性能和共聚焦层切的性能,提高了 SIM显微系统对厚样品成像的能力以及降低了结构光调制的复杂度。3、针对点扫描虚拟结构探测显微技术成像速度慢的问题,提出了基于傅里叶叠层重建的线扫描虚拟结构探测超分辨显微成像(PHI-FP-vLSM)技术,大幅度提高了成像的速度。针对Theta-FP重建算法会丢失部分信息而使最终重建的图像不完整的问题,提出了基于不同空间频率和相位变化的余弦函数调制的PHI-FP重建算法用于重建vLSM超分辨图像。4、由于傅里叶叠层算法需要在空间域和傅里叶域之间施加约束反复迭代,导致超分辨图像重建速度比较慢。为了缩短重建超分辨图像的时间,在本文中提出了非线性重建算法,该算法只需要在空间域计算就能恢复出高频信息,极大地提高了超分辨图像重建速度,为辅助Theta-FP和PHI-FP实现实时观察提供了基础。5、设计了组合涡旋相位在高数值孔径时生成轴向定位深度可调节的双螺旋PSF,并基于菲涅尔近似衍射成像原理开发出了相应的优化算法。采用优化后的组合涡旋相位对荧光分子进行定位,在数值孔径为1.4时,可实现轴向探测深度10 μm的高精度三维定位成像,为三维单分子定位超分辨成像提供了基础。
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