富血小板纤维蛋白联合姜黄素纳米粒水凝胶对糖尿病小鼠创面愈合影响的研究

来源 :西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:RubbishHP
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目的:观察富血小板纤维蛋白联合姜黄素纳米颗粒水凝胶对糖尿病小鼠创面愈合的影响。方法:(1)将ε-己内酯(ε-CL)和聚乙二醇(PEG)通过开环聚合反应合成PCL-PEG-PCL(PCEC)共聚物。以PCEC为载体,姜黄素标准品为原料,制备理论载药率为10%的姜黄素纳米颗粒,观察其微观形貌,测定实际载药率和包封率。以透明质酸(HA)和盐酸酪胺(Tyr)为原料制备酪胺修饰的透明质酸(HA-Tyr),观察HA-Tyr微观形貌,测定并比较HA和HA-Tyr的分子结构。将姜黄素纳米颗粒与透明质酸水凝胶充分混合,获得姜黄素纳米颗粒水凝胶(Cur-NPs/HA)。(2)麻醉状态下摘除小鼠一侧眼球,用玻璃离心管接取2m L小鼠眼球血,以一定的转速和时间离心后得到富血小板纤维蛋白。(3)将100只C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组(Control组,n=20)和糖尿病组(n=80)。将糖尿病组小鼠予链脲佐菌素(STZ)小剂量多次腹腔注射,建立2型糖尿病小鼠模型。用直径1厘米的皮肤打孔器在小鼠背部制作圆形全层皮肤损伤创面,形成2型糖尿病创面模型。将造模成功的72只小鼠随机分为糖尿病对照组(DM组)、富血小板纤维蛋白+游离姜黄素组(PRF+Free Cur组)、富血小板纤维蛋白+姜黄素纳米颗粒组(PRF+Cur-NPs组)、富血小板纤维蛋白+姜黄素纳米颗粒水凝胶组(PRF+Cur-NPs/HA组),各组n=18。Control组(n=18)小鼠腹腔注射与STZ等量的生理盐水,制作与糖尿病组同样的创面模型。各组小鼠分别予以对应的干预方案,并于创面造模后第3、9和12天分别观察各组小鼠的创面愈合情况,比较创面愈合率,取创缘组织制备石蜡切片待检:HE染色(炎症细胞浸润);免疫组织化学染色(中性粒细胞、巨噬细胞浸润、血管生成);Masson染色(胶原纤维形成);免疫荧光双重染色巨噬细胞极化)。用SPSS24.0软件对数据进行统计分析。结果:体外实验表明,与游离姜黄素相比,姜黄素纳米颗粒的水溶性、稳定性明显提高。透明质酸水凝胶具有疏松多孔的网状结构,这种结构有利于药物的吸附和缓释。体内实验表明,PRF+Cur-NPs/HA组创面愈合情况优于其他药物干预组及DM组,炎细胞浸润及肉芽成熟度最接近于Control组。创面造模后12天,PRF+Cur-NPs/HA组创面愈合率高于DM组、PRF+Free Cur组及PRF+Cur-NPs组,差异具有显著性意义(P均<0.05);PRF+Cur-NPs/HA组与Control组创面愈合率比较,差异无显著性意义(P=0.216)。创面造模后3天,Ly6G阳性细胞平均数量比较:PRF+Cur-NPs/HA组与DM组、PRF+Free Cur组相比,差异有显著性意义(P均<0.001);PRF+Cur-NPs/HA组与Control组、PRF+Cur-NPs组比较,差异无显著性意义(P=0.206、0.082)。创面造模后9天,F4/80阳性细胞平均数量比较:PRF+Cur-NPs/HA组与DM组、PRF+Free Cur组、PRF+Cur-NPs组相比,差异有显著性意义(P均<0.001);PRF+Cur-NPs/HA组与Control组比较,差异无显著性意义(P=0.351)。创面造模后9天,Arg-1阳性细胞平均数量比较:PRF+Cur-NPs/HA组与DM组、PRF+Free Cur组、PRF+Cur-NPs组相比,差异有显著性意义(P均<0.01);PRF+Cur-NPs/HA组与Control组比较,差异无显著性意义(P=0.435)。创面造模后9天,i NOS阳性细胞平均数量比较:PRF+Cur-NPs/HA组与DM组、PRF+Free Cur组、PRF+Cur-NPs组相比,差异有显著性意义(P均<0.001);PRF+Cur-NPs/HA组与Control组比较,差异无显著性意义(P=0.638)。创面造模后12天,Control组、PRF+Free Cur组、PRF+Cur-NPs组、PRF+Cur-NPs/HA组都可看到大量排列致密,分布均匀的胶原纤维,但Control组和PRF+Cur-NPs/HA组胶原数量更多,颜色深染。然而,DM组的胶原纤维排列杂乱疏松,分布不均匀,颜色淡染,数量也不及其他各组。创面造模后12天,CD31阳性细胞平均数量比较:PRF+Cur-NPs/HA组与DM组、PRF+Free Cur组、PRF+Cur-NPs组相比,差异有显著性意义(P均<0.01);PRF+Cur-NPs/HA组与Control组比较,差异无显著性意义(P=0.635)。结论:富血小板纤维蛋白与姜黄素纳米颗粒水凝胶的联合应用可以有效改善创面炎症情况,促进糖尿病小鼠创面愈合,为糖尿病创面的临床治疗提供了新的实验基础。
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