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目的:明确大黄素对LPS刺激后巨噬细胞(RAW264.7细胞)氧化应激及炎症相关指标的影响,并探索其中的相关机制。方法:第一部分实验用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测大黄素对RAW264.7细胞的毒性作用,筛选出大黄素作用的最佳浓度为15μmmol/L,根据实验目的,最终根据实验目分为三组,分别为:Control组:不加入脂多糖(LPS)及大黄素(Emodin);LPS组:给予LPS,1μg/m L;LPS+Emodin组:预先给予Emodin15μmmol/L,30min后加入1μg/m L的LPS。观察时间点为3h,6h,9h,12h。相应时间点结束后,收集标本采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹法(Western Blot)检测巨噬细胞核因子E2相关因子2(Nrf2)转录和总蛋白、核蛋白及浆蛋白表达水平,使用过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)的活性及丙二醛(MDA)试剂盒检测CAT、GSH—Px活性及MDA含量;另外通过酶联免疫吸附实验(ELISA)联合酶标仪检测各时点各组上清液中白细胞介素-6(IL-6)及白细胞介素-10(IL-10)浓度。第二部分实验根据实验目的分为四组,分别为:Control组:同第一部分实验中Control组处理;LPS组:同第一部分实验中LPS组处理;LPS+Emodin组:同第一部分实验中LPS+Emodin组处理;LPS+Emodin+ML385(Nrf2抑制剂)组:预先给予Emodin15μmmol/L,30min后同时加入LPS 1μg/m L及ML385 5μmmol/L;仅选择一个时点9h后检测上述各组巨噬细胞内Nrf2总蛋白,核蛋白及浆蛋白表达水平,并测定细胞CAT和GSH—Px的活性及MDA含量,以及细胞培养上清液中IL-6和IL-10的浓度。结果:第一部分实验:单纯LPS刺激巨噬细胞后,与Control组比较,Nrf2 m RNA从3h开始增加,在6h、9h表达显著增高(P<0.05);Nrf2总蛋白水平在3h开始表达,在9h显著增高(P<0.05),12h开始下降。而Nrf2核蛋白水平在各时间点无显著变化(P>0.05)。Nrf2浆蛋白在3h开始增加,在9h显著升高(P<0.05),12h开始下降。与LPS组比较,LPS+Emodin组中巨噬细胞Nrf2m RNA表达水平在6、9、12h均更高(P<0.05),并在6h达到峰值;Nrf2总蛋白表达水平亦在6、9、12h均更高(P<0.05),在9h达到高峰;且Nrf2核蛋白表达水平在9、12h较单纯LPS诱导也显著更高(P<0.05),并在9h达到高峰;但Nrf2浆蛋白水平在9、12h较单纯LPS处理显著更低(P<0.05)。另外,大黄素在9h、12h显著增高LPS诱导的CAT活力效应(P<0.05);且在6、9h亦显著增高LPS诱导的GSH-px活力改变(P<0.05);在6、9h显著降低LPS诱导的MDA含量变化(P<0.05)。此外,相较于单纯的LPS刺激,大黄素在6h、9h、12h显著降低IL-6水平(P<0.05),而明显增高IL-10表达水平(P<0.05)。第二部分实验:使用Nrf2特异性抑制剂ML385后,在观察时点为9h时,LPS+Emodin+ML385组的Nrf2总蛋白及核蛋白表达水平均较相应的LPS+Emodin组表达降低(P<0.05),同时LPS+Emodin+ML385组中CAT及GSH-px活力亦分别较LPS+Emodin组显著降低(2.35±0.51 vs.4.47±0.94mmol/L,64.12±7.40 vs.88.81±7.65U/mgprot,P<0.05),而MDA含量比LPS+Emodin组显著增高(2.48±0.42vs.1.38±0.11nmol/mgprot,P<0.05);此外,LPS+Emodin+ML385组上清液中IL-6浓度显著高于LPS+Emodin组(161.82±6.37 vs.132.45±10.42mmol/L,P<0.05mmol/L),而IL-10浓度显著低于LPS+Emodin组(435.26±19.87 vs.521.53±36.51mmol/L,P<0.05)。结论:大黄素可能过上调Nrf2表达、并促进Nrf2蛋白入核,减轻LPS诱导的小鼠巨噬细胞氧化应激与炎症反应。