神农香菊Chrysanthemum indicum var.aromaticum 是菊科 Compositae 菊属的一个新变种,发现于湖北神农架地区,它具有很高的药用价值和经济价值[1]。本文以神农香菊为物质基础,采用少溶剂微波辅助蒸馏同时萃取技术提取神农香菊叶精油,利用(GC-MS)气相色谱-质谱联用测定精油成分,同时采用微波辅助提取法提取神农香菊叶中的绿原酸及蒙花苷,并通过高效液相色谱法(HPLC)测定神农香菊叶中绿原酸及蒙花苷的含量,然后利用实验获得的精油考察神农香菊叶精油对黄芪根腐主要致病镰刀菌的抑制程度。其主要内容如下:1.采用少溶剂微波辅助蒸馏同时萃取技术提取神农香菊精油并利用GC-MS测定精油成分。该实验装置是由顶端钻孔微波炉、圆底烧瓶、油水分离管和冷凝管连接而成,通过单因素及响应面Box-Behnken法优化研究了主要工艺参数对精油得率的影响。在最优化的条件下,以2 mL/g的液料比、40 min的微波辐照时间和540 W的微功率辐照,可获得最高的精油得率。与传统方法相比,该实验方法有效的提高了精油的得率。此外,对精油的GC-MS分析表明:少溶剂微波辅助水蒸气蒸馏法所提精油中鉴别出的化合物占总量的98.86%,常规水蒸汽蒸馏法所提精油中鉴别出的化合物占总量的98.34%。神农香菊叶精油得率为0.34%±0.04%。神农香菊叶精油中主要含萜烯类成分,主要丰量成分为乙酸桃金娘烯酯(21.72%)和顺式香桧醇(19.23%)。2.采用微波辅助提取法从神农香菊叶精油提取剩余物中提取的绿原酸及蒙花苷,通过HPLC法建立了高效液相色谱法检测条件同时测定绿原酸及蒙花苷,Agilent 5 TC-C18色谱柱(填料粒径5 μm,柱长度250 mm,直径4.6 mm),以0.5 mL/min流速、10μL进样量、328 nm紫外线检测波长、30℃柱温、0.8%磷酸水-乙腈-甲醇梯度洗脱(0-30 min:80%-5%-15%;30-45 min:30%-5%-65%;45-50 min:10%-5%-85%;50-75 min:80%-5%-15%)。根据单因素实验结果确定响应面优化条件,根据响应面Box-Behnken法结果得到在最佳提取条件为液料比34 mL/g、微波辐照功率540 W、微波辐射时间20 min时绿原酸及蒙花苷得率最高,其中绿原酸提取率为27.36±0.35 mg/g,蒙花苷提取率为9.21 ± 0.23 mg/g。3.对获得的神农香菊叶精油进行抑菌实验研究,考察神农香菊精油对拟丝孢镰刀菌(F.trichothecioides)及黄色镰刀菌(F.culmorum)的抑制效果,结果表明:神农香菊叶精油对拟丝孢镰刀菌的最低抑菌浓度为1.5μL/mL、最小杀菌浓度为4 μL/mL,对黄色镰刀菌的最低抑制浓度为2 μL/mL、最小杀菌浓度为5 μL/mL。根据实验结果可以知道神农香菊叶精油对拟丝孢镰刀菌及黄色镰刀菌具有抑制作用,但拟丝孢镰刀菌对精油的敏感性比黄色镰刀菌更强。