实验背景及目的:面肌痉挛（Hemifacial Spasm,HFS）是一种临床上比较常见的颅神经疾病,其主要的症状表现为一侧面部肌肉不自主的阵发性抽动。面神经微血管减压手术是目前治疗HFS的首选方案,并且已在全世界广泛开展。虽然面肌痉挛在治疗方面已经有了很好的成绩,但至今为止它的发病机制仍然是众说纷纭,尚未有一个统一的观点来全面、完整地阐述其具体的发生、发展过程,且目前的研究和探索大多集中在面神经的电生理数据及病理结构改变方面。本研究将通过观察门控钠离子通道在HFS面神经外周段脱髓鞘部位的表达,明确钠离子通道蛋白有无表达上调和异常聚集,分析轴膜钠离子通道对面神经功能和临床症状的影响,研究通道的不同聚集状态与神经传导功能的相关性,探讨异位放电活动与HFS的关系。另一方面,通过对HFS面神经运动神经元（facial motoneuron,FMN）的形态、数量以及膜电位特性研究,观察其是否存在神经元兴奋性增高的表现。实验方法:第一部分:制作SD大鼠HFS动物模型,并通过行为学、神经电生理学以及病理学等方法进行验证和评估。第二部分:取材面神经主干,通过RT-PCT、Western blot和免疫组化的方法检测Nav1.6mRNA和蛋白在面神经受压脱髓鞘段的表达。第三部分:针对成年大鼠建立一套稳定的脑片制备方法,分析不同实验条件、切片液以及孵育温度对脑片活性和膜电位基本特性的影响。第四部分:通过尼氏染色对FMN进行形态观察和计数;运用膜片钳技术在全细胞记录模式下检测FMN的静息膜电位、膜输入阻抗、基强度、动作电位阈值、动作电位幅值、动作电位半高宽、平均放电频率、后极化电位等指标,分析神经元电压门控钠离子通道特性。实验结果:第一部分:通过含铬羊肠线使面神经脱髓鞘+颞浅动脉压迫成功建立了SD大鼠HFS动物模型,并通过行为学、神经电生理学以及病理学验证。第二部分:通过RT-PCR发现HFS组面神经Nav1.6mRNA相对表达量较对照组显著上调,是对照组的3.28倍。Western blot结果表明HFS模型面神经外周段上Nav1.6钠通道亚基的蛋白表达明显增高,为对照组的4.23倍。免疫组化显示HFS组面神经轴膜上Nav1.6呈条索状阳性表达,较假手术对照组明显延长。第三部分:成功建立了一套针对成年大鼠的脑片制备方法:术前采取4°C人工脑脊液进行心脏灌流、使用高蔗糖溶液或低钙高镁人工脑脊液进行孵育和切片、用较高温度预孵育等措施可以有助于提高成年大鼠的脑片质量,且对神经元静息膜电位、动作电位阈值和幅值等膜电位特性无明显影响。第四部分:尼氏染色的结果提示,HFS模型的面神经运动神经元未出现形态学及数量上的明显变化。通过膜片钳技术对FMN检测发现,HFS模型的FMN静息膜电位下的输入阻抗增高,基强度降低,动作电位的阈值降低,动作电位的幅值增高,在不同强度刺激下的放电频率增加。HFS模型FMN静息膜电位、动作电位半宽高、后超级化电位与对照组相比无明显差异。与正常对照组相比,HFS组大鼠FMN上钠电流的激活电位阈值降低,峰值电流幅度明显增高。实验结论:HFS面神经脱髓鞘部位的Nav1.6mRNA和蛋白表达显著上调;面神经核团中运动神经元存在兴奋性增高,钠峰值电流增加的现象。因此我们推测:门控电压Nav1.6通道蛋白在面神经脱髓鞘部位的表达及分布异常可能与面肌痉挛的发病机制有关;另一方面,HFS面神经运动神经元过度兴奋也参与了面肌痉挛的发生。