【摘 要】
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第一部分RT-PCR/Southern杂交法检测穹窿海马伞切割大鼠海马Brn-4 mRNA的表达变化目的:用RT-PCR/Southern杂交法进一步观察切割穹窿海马伞大鼠海马与正常海马内Brn-4 mRNA表达的差异,探讨穹窿海马伞切割后海马内神经再生与修复的分子生物学机制。方法:42只SD大鼠随机分成7组,每组6只。1组为正常对照组,其余6组分别为切割双侧穹窿海马伞后1、3、7、14、21和2
【基金项目】
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国家自然科学;江苏省自然科学基金;；
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第一部分RT-PCR/Southern杂交法检测穹窿海马伞切割大鼠海马Brn-4 mRNA的表达变化目的:用RT-PCR/Southern杂交法进一步观察切割穹窿海马伞大鼠海马与正常海马内Brn-4 mRNA表达的差异,探讨穹窿海马伞切割后海马内神经再生与修复的分子生物学机制。方法:42只SD大鼠随机分成7组,每组6只。1组为正常对照组,其余6组分别为切割双侧穹窿海马伞后1、3、7、14、21和28d组。取各组大鼠的海马组织,提取总RNA,采用RT-PCR/Southern杂交方法分析穹窿海马伞切割后海马内Brn-4 mRNA表达水平的变化。以各组Brn-4与内参GAPDH RT-PCR/Southern杂交条带的光密度比值表示Brn-4 mRNA的相对表达量,使用Stata7.0统计学软件进行单因素方差分析和两两比较。结果:海马内Brn-4 mRNA的相对表达量正常组为0.254±0.018,切割后1d、3d、7d、14d、21d、28d组分别为0.277±0.019、0.516±0.014、1.497±0.081、2.357±0.133、1.140±0.054、0.264±0.020。统计学分析表明,切割后l d、28 d组与正常对照组相比,Brn-4 mRNA的相对表达量差异无显著性意义（P>0.05）,3 d、7 d、14 d和21d组与正常对照组相比,差异均有显著性意义（P<0.01）;比较切割后不同时间组,除1 d组与28 d组间的差异无显著性意义（P>0.05）外,其余各组间的表达差异均有显著性意义（P<0.01或0.05）。结论:切割穹窿海马伞后的海马组织中Brn-4 mRNA表达量自切割后第3d开始明显升高,14d时达到最高水平,以后开始下降,于28d恢复至正常水平。结合本课题组以往的工作,Brn-4 mRNA的升高可能与促进海马内神经干细胞向神经元的分化有关。第二部分NGF对穹窿海马伞切割后海马自体NSCs增殖和向神经元分化的影响目的:探讨切割穹窿海马伞及脑室给予神经生长因子（nerve growth factor, NGF）后对大鼠海马自体神经干细胞增殖和分化为神经元的影响。方法:12只SD大鼠,随机分成给药组和对照组,每组6只。两组均切割右侧穹窿海马伞,给药组和对照组切割后即时及第2d、4d向侧脑室分别注射NGF和人工脑脊液,并在术后第3～7d每日经腹腔注射BrdU 2次。于术后28d灌注取脑、冰冻切片,行BrdU/NF-200免疫荧光双标检测。分别拍摄海马齿状回同一视野下BrdU阳性细胞和NF-200阳性细胞的图像,然后应用Spot 4.6图像处理软件进行重叠,并分别计数海马齿状回门区、颗粒下层及颗粒层中BrdU阳性细胞和BrdU/ NF-200双标神经元。数据输入Stata 7.0统计软件,进行两因素的方差分析（2×2析因设计）,用q检验（SNK法）进行组间比较。结果:海马齿状回内BrdU阳性细胞数,给药组和对照组切割侧明显多于正常侧,给药组切割侧和正常侧分别多于对照组切割侧和正常侧;海马齿状回内的BrdU/NF-200双标神经元数,给药组切割侧最多,给药组正常侧和对照组切割侧较少,而对照组正常侧中则无。结论:切割穹窿海马伞后,可致大鼠海马齿状回中自体神经干细胞增殖加快并向神经元分化。切割穹窿海马伞后于侧脑室中施加NGF,可促进大鼠海马齿状回中自体神经干细胞的增殖和向神经元分化。
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