蛋白磷酸化在丝状真菌细胞对外界纤维素酶诱导信号感应以及胞内信号的传导过程中有着重要的作用。蛋白磷酸化是由蛋白激酶和磷酸化酶共同作用来完成的。为了挖掘在丝状真菌纤维酶表达过程中发挥重要作用的蛋白激酶基因,本研究对粗糙脉孢菌丝氨酸/苏氨酸家族的62株蛋白激酶单基因突变体的纤维素酶表达分泌情况进行了系统的分析。在以微晶纤维素为唯一碳源的条件下,与野生型相比,有5株突变体(△NCU07378、△NCU00914、△NCU06638、△NCU01187 和 △NCU01940)的蛋白和酶活显著提高,有3株突变体(△NCU06685、△NCU04426和△NCU08346)显著降低。值得注意的是,其中胞外蛋白提高最为显著的是△NCU07378(△stk-12),因此将基因stk-12作为后续研究的重点。回补实验说明△stk-12的表型是由缺失基因stk-12引起的,暗示STK-12负调控纤维素酶的表达。敲除stk-12会使得突变株在不同碳源(葡萄糖、甘油、木糖或纤维二糖等)上均表现出明显的生长缺陷。同时,STK-12在维持菌株的抗渗透压、抗氧化和保持细胞壁完整性方面具有一定的作用。此外,△stk-12△cre-1双突变体的蛋白比其中任何一个单突变体△stk-12或者Acre- .的都要高,意味着敲除stk-12和cre-2对于提高纤维素酶表达具有协同作用,且△stk-12纤维素酶的提高不是通过解除碳代谢阻遏来实现的。为了验证在纤维二糖条件下stk-12如何调控纤维素酶的表达,通过杂交构建了△stk-12△3βG四突变体,△stk-12△3βG的纤维二糖消耗速率高于△3βG。另一方面,RT-qPCR的结果显示△stk-12△3βG突变体中纤维寡糖转运蛋白基因的转录水平显著上调。这些结果说明stk-12参与到了纤维素酶诱导途径中。除此之外,stk-12很有可能是通过PKA途径来影响纤维素酶的表达的。最后,为了验证stk-12功能在其他丝状真菌中功能的保守性,构建了其在嗜热毁丝霉中同源基因的敲除菌株△Mt-stk-12,突变株的纤维素酶表达量和活性均显著提高,这表明stk-12的功能在纤维素酶的表达过程中是高度保守的。总之,这些关于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因的筛选及其功能的初步解析,为深入研究蛋白激酶在纤维素酶诱导表达调控中的分子机理奠定了良好的理论基础。