论文部分内容阅读
目的:探讨中药消瘤方对大鼠子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)模型盆腔粘连的影响,对子宫内膜异位症炎症反应的作用及可能的信号通路。方法:Haber法建立自体移植的大鼠盆腔子宫内膜异位症模型;术后4周将建模成功的大鼠随机分为四组:空白对照组、米非司酮组、低剂量消瘤方组、高剂量消瘤方组,分别予以等量的生理盐水、米非司酮混悬液1.05 mg/(kg*d)、消瘤方提取物1.89 g/(kg*d)、消瘤方提取物3.78 g/(kg*d)连续灌胃4周。剖腹探查,观察异位病灶生长及盆腔粘连情况;Haber法、AFS评分法对模型盆腹腔粘连情况进行评分;测量并计算异位病灶体积。ELISA法检测大鼠血清中白介素6、15、18(IL-6,IL-15,IL-18)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、及血管内皮生长因子(VEGF)、细胞间粘附分子1(ICAM-1)含量及组织中组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)含量。免疫组化法检测异位组织中TNF-α、VEGF、ICAM-1蛋白表达情况。免疫组化法检测粘连组织TLR4/NF-κB/TNF-α的表达情况;q PCR检测TLR4/NF-κB/TNF-α通路的m RNA水平;Western blot检测TLR4/NF-κB/TNF-α通路的蛋白表达。结果:1.异位病灶生长、组织粘连情况:剖腹探查可见对照组异位内膜组织生长良好,病灶与周围组织,肠管间紧密粘连;低剂量消瘤方组异位内膜囊泡体积小,肠管间可见薄膜状粘连;高剂量消瘤方组及米非司酮组异位组织萎缩,或仅剩残余组织,肠管间偶见膜状粘连。2.病灶体积、盆腔粘连评分:与对照组相比,药物处理后各组病灶体积明显缩小,盆腔粘连评分显著降低(p<0.01);低剂量消瘤方组较高剂量消瘤方组及米非司酮组病灶体积小,盆腔粘连评分低(p<0.05);高剂量消瘤方组与米非司酮组病灶体积、盆腔粘连评分无明显差异(p>0.05)。3.血清IL-6,IL-15,IL-18,TNF-α,VEGF,ICAM1含量:对照组血清中各细胞因子表达与药物处理后大鼠有显著差异(p<0.05),其中IL-6,IL-15,TNF-α,VEGF,ICAM1水平明显降低,IL-18值明显升高;高剂量消瘤方组与米非司酮组相较于低剂量消瘤方组各细胞因子水平有较大差异(p<0.05),高剂量消瘤方组和米非司酮组相比各细胞因子水平则无明显差异(p>0.05)。4.异位组织t-PA活性,MVD值,VEGF、TNF-α、ICAM-1蛋白,粘连组织TLR4/NF-κB/TNF-α通路蛋白表达情况:与对照组相比,药物处理后各组异位组织t-PA活性明显升高,MVD,VEGF、TNF-α、ICAM-1蛋白,粘连组织TLR4/NF-κB/TNF-α通路蛋白表达均有不同程度下降(p<0.05);与低剂量消瘤方组相比,高剂量消瘤方组和米非司酮组t-PA活性升高,MVD,VEGF、TNF-α、ICAM-1蛋白,粘连组织TLR4/NF-κB/TNF-α通路蛋白表达均有所下降(p<0.05),高剂量消瘤方组和米非司酮组t-PA活性、MVD等蛋白表达情况均无显著差异(p>0.05)。5.药物处理后各组TLR4、NF-κB和TNF-α的m RNA水平,蛋白质表达均有不同程度的降低,与对照组相比差异具有统计学意义(p<0.05),高剂量消瘤方组和米非司酮组相较于低剂量消瘤方组,m RNA水平、蛋白质显著降低(p<0.05),而高剂量消瘤方组和米非司酮组相比无显著差异(p>0.05)。结论:经消瘤方处理后的EMs大鼠盆腔粘连明显减轻,异位病灶体积缩小,血清,异位病灶及粘连组织相关细胞因子水平发生显著改变,TLR4/NF-κB/TNF-α信号通路关键基因表达水平降低,表明中药消瘤方可能通过调节TLR4/NF-κB/TNF-α信号通路改善盆腔炎症反应,抑制异位内膜病灶的生长,减轻盆腔粘连。