【摘 要】
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[目的]苦马豆素(SW)是疯草的主要有毒成分,中毒家畜临床表现为母畜不孕、流产和死胎等,给我国草原畜牧业造成巨大的经济损失.关于SW引起妊娠山羊流产的早期研究发现,SW能
【机 构】
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西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌,712100
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物毒物学分会第十三次学术研讨会
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[目的]苦马豆素(SW)是疯草的主要有毒成分,中毒家畜临床表现为母畜不孕、流产和死胎等,给我国草原畜牧业造成巨大的经济损失.关于SW引起妊娠山羊流产的早期研究发现,SW能干扰胎盘的正常发育并影响绒毛膜上皮细胞的功能.本论文在永生化山羊滋养层细胞的基础上,研究SW对山羊滋养层细胞增殖和侵袭特性的影响和SW引起山羊滋养层细胞周期阻滞和凋亡的分子机制,为阐明SW引起妊娠山羊流产提供理论依据.[材料方法]通过胶原酶法消化妊娠山羊胎盘组织,密度梯度离心法和免疫磁珠负性筛选法纯化滋养层细胞,电转法转染pCI-neo-hTERT质粒永生化滋养层细胞,细胞扩增并鉴定；MTT和台盼蓝染色检测SW对滋养层细胞增殖和活性的影响,流式细胞术和Western blot检测SW对滋养层细胞周期的影响和相关分子变化,细胞划痕试验和Transwell试验检测SW对滋养层细胞迁移和侵袭能力的影响,明胶酶谱分析检测MMP-2,9活性的变化；AO/EB染色、DNA Ladder和流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白的变化.[结果]分离得到的山羊滋养层细胞角蛋白7(CK-7)染色阳性率为100％,表达波形蛋白、钙粘素和MHC-1分子；转染后扩大培养到50代以上,能够分泌绒毛膜促性腺激素和胎盘催乳素,不具有非锚着依赖生长特性和致瘤性；SW能抑制滋养层细胞增殖、迁移和侵袭,抑制MMP-2,9的活性；SW阻滞滋养层细胞周期在G0/G1期,AO/EB染色发现早期凋亡细胞细胞核呈念珠状或马蹄形,琼脂糖凝胶电泳出现明显DNA Ladder,SW激活滋养层细胞Caspase-9和Caspase-3,而对Caspase-8活性没有显著的影响,FasL和Fas的表达没有显著变化,促凋亡蛋白Bax的表达上调,抑制凋亡分子Bcl-2表达下调, Bax向线粒体转位,促使线粒体内Cytc释放,而细胞浆中Cyt c含量升高.[结论]研究结果表明,SW抑制滋养层细胞迁移和侵袭呈时间和剂量依赖性,并且抑制细胞中MMP-2,9活性.SW阻滞滋养层细胞周期于G0/G1期,通过线粒体途径引起滋养层细胞凋亡.
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