【摘 要】
：
根据GenBANK的核酸序列,设计8对引物从TGEV模板中分别扩增了1.9kb、1.6kb、1.5kb、2.0kb、1.1kb,1.4kb,1.4kb,1.3kb共8个片段,经测序拼接后获得8495 bp的TGEV序列.根据与其他TGEV和冠状病毒的序列和结构特征比较表明,该段序列克隆了除TGEV聚合酶基因以外的S、M、N、E、NSP3A、NSP3B、ORF7S、M、N、E、NSP3A、NSP3B
【机 构】
：
四川农业大学动物生物技术中心,四川,雅安,625014 东莞市出入境检验检疫局,广东,东莞,523
【出 处】
：
中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会
论文部分内容阅读
根据GenBANK的核酸序列,设计8对引物从TGEV模板中分别扩增了1.9kb、1.6kb、1.5kb、2.0kb、1.1kb,1.4kb,1.4kb,1.3kb共8个片段,经测序拼接后获得8495 bp的TGEV序列.根据与其他TGEV和冠状病毒的序列和结构特征比较表明,该段序列克隆了除TGEV聚合酶基因以外的S、M、N、E、NSP3A、NSP3B、ORF7S、M、N、E、NSP3A、NSP3B、ORF7七个基因;根据S、M、N基因构建的进化树分析表明,TGEV-SCY株与TS、HN2002、TO14、TS、pudue等毒株亲缘关系较近;密码子偏爱性分析结果认为TGEV在对密码子的存在轻微的偏向性,个别氨基酸偏向于选择以A和T结尾的密码子.
其他文献
用多联PCR方法以从猪舍污水中分离的细菌进行鉴定,获得一株C型产气荚膜梭菌;用PCR方法扩增了plc基因并进行了测序鉴定,获得了包括-35区、-10区、转录其始位点、信号肽基因和全长成熟肽基因以及部分3末端序列的plc基因,与GeneBank中A、C型菌序列进行同源性比较,该野生C型菌与二者的同源性分别达到98.7％和98.6％,其中野生型菌株的-35区发生一个碱基突变(G→C)氨基酸同源性为99
将原核启动子Ptrc和加强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因从EGFP原核表达质粒pYA3334-EGFP上切下,然后将其插入至真核表达质粒pVX1真核启动子PCMV的下游构建成具有真核和原核启动子的双表达杂合质粒pVAXD-EGFP.新构建的质粒全长3823bp,pVAXD-EGFP分别转化鼠伤寒沙门氏菌X4550和转染COS-7细胞,应用流式细胞术、可见光谱扫描、SDS-PAGE测定EGFP原核表
通过RT-PCR方法获得含有口蹄疫毒的P1、3CD编码区的目的基因.将P1基因经Bg1Ⅱ和XhoI,3CD基因经XhoI和XhaI双酶切后与经Bg1Ⅱ和XhoI双酶切处理的腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV连接.通过酶切及PCR鉴定,结果证明口蹄疫病毒目的基因片段已被正确克隆到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV上.
本研究将I型超毒MDV Md11株的pp38和pp24完整基因分别克隆到真核双表达载体pBudCE4.1中,在脂质体作用下将阳性克隆DNA转染CEF,通过间接免疫荧光试验(IFA)用单克隆抗体H19和鼠抗GST-pp24血清分别检测到了pp38和pp24基因的单独表达.然后将MDV Md11株的pp38和pp24完整基因同时克隆到载体pBudCE4.1中,在脂质体作用下将阳性克隆DNA转染CEF,
利用一对自行设计的引物,通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),从ConA诱导的5周龄SPF鸡脾细胞中扩增出鸡白细胞介素2(IL-2)基因片段,其长充为439bp,经酶切鉴定,初步确认为鸡IL-2基因.再将该IL-2基因片段定向插入真核表达质粒pcDNA3中,经DNA序列鉴定,表明构建的重组质粒含有IL-2基因,该基因的cDNA序列与Sundick报道的结果基本一致.此外,将IL-2基因片段插入
为了获得猪瘟病毒E2可溶性糖蛋白,本研究用增强烈型荧光蛋白基因(EGFP)作为标签,将猪瘟兔化弱毒(HCLV)E2基因克隆至pCI表达质粒CMV启动了之下,构建了含有EGFP和HCLVE2融合基因(GFPTE2)的真核表达质粒pCIGFPTE2-339.转染二氢叶酸还原酶缺陷型CHO细胞CHO(dhfr)后,用0.25uM的氨甲喋(MTX)加压筛选,10天后在荧光显微镜下观察到了暗绿色荧光,说明p
从山东、河南、江苏、辽宁、河北、广西等10余个省、市、自治区临诊上有典型大肠杆菌病病变的病禽2000多羽采集病料,分离培养和鉴定出504株大肠杆菌.其中126株,经O血清型鉴定,除18株未能定型,7株自凝外,共鉴定出101个分离株为O血清型,这些分离株覆盖了31个血清型,但以078、02、O45、O109、O18、O8/O93、O107、O53、O154等10个血清型为主,共53株,占定型菌株的5
目前已有许多动物被用作STEC和stx相关疾病的模型研究,这些动物在作为模型的可利用性、费用、操作的难易度、与人类疾病的相似性及其它因素方面都有它的利和弊.总之,每种动物模型都可能为将来成功地预防、控制和治疗人类STEC感染提供重要线索.
本研究针对EHEC O:H的stx基因通过PCR扩增出缺失了183bp的stx基因片段,将其克隆到自杀性载体pCVD442中,然后通过接合性转导将重组自杀性质粒pCVD442::△stx从SM10pir转到O:H中,利用抗性标记和PCR方法筛选出O:H stx基因缺失突变菌株.Vero细胞毒性实验证实该突变株不能产生完整的Stx.动物实验表明与强毒株相比该突变株的致病性明显降低.该突变株的构建为研
选择临床健康的1.5-2月龄的无猪瘟病毒感染和无猪瘟抗体的大白猪,共17只.分三组,A组接种猪瘟兔化弱毒,B组接种猪瘟石门强毒,C组为阴性对照.定期采集三组猪的抗凝血和血清进行16项生理指标15项生化指标的测定.将测定结果进行t检验表明:A组与B组生理生化指标差异显著的是ALB;A组与C组生理生化指标差异显著的是TBIL、PCT;B组与C组生理生化差异显著的是BUN、PCT、PLT、GR％.