脊髓神经元sonic hedgehog信号通路在小鼠吗啡耐受中的作用

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目的

评价脊髓神经元sonic hedgehog(SHH)信号通路在小鼠吗啡耐受中的作用。

方法

清洁级健康雌性昆明小鼠,体重20~25 g,8~10周龄。采用皮下注射吗啡10 mg/kg,2次/d,连续7 d的方法制备吗啡耐受模型。实验Ⅰ 小鼠48只,采用随机数字表法分为2组:正常对照组(C组,n=8)和吗啡耐受组(M组,n=40)。于吗啡注射前1 d和注射结束后1、3、5、7和14 d时测定热痛阈。M组注射结束后各时点热痛阈测定后2 h时、C组于最后一次热痛阈测定后2 h时随机处死8只小鼠,取L4-6脊髓组织。实验Ⅱ 小鼠48只,采用随机数字表法分为6组(n=8):SHH抑制剂环巴胺+吗啡耐受组(CP+M组)、环巴胺溶媒+吗啡耐受组(D1+M组)、SHH激动剂SAG+吗啡耐受组(SAG+M组)、SAG溶媒+吗啡耐受组(D2+M组)、吗啡耐受+环巴胺组(M+CP组)、吗啡+环巴胺溶媒组(M+D1组)。于吗啡注射前15 min时,CP+M组腹腔注射环巴胺10 mg/kg,SAG+M组腹腔注射SAG 5 mg/kg。M+CP组吗啡给药结束后1~3 d时腹腔注射环巴胺10 mg/kg,1次/d。于吗啡注射前、每天第1次吗啡注射后30 min、吗啡给药结束后1~3 d时测定热痛阈。最后一次热痛阈测定结束后2 h时处死,取L4-6脊髓组织。采用Western blot法检测脊髓SHH信号通路相关蛋白SHH、ptch1、smo、gli1和gli3的表达水平。

结果

实验Ⅰ 与C组比较,M组热痛阈于吗啡注射结束后1、3 d时降低(P<0.05),5~14 d时差异无统计学意义(P>0.05),吗啡注射结束后1~5 d时脊髓SHH、smo和gli1表达上调,1和3 d时ptch1表达上调,7 d时gli3表达上调(P<0.05)。实验Ⅱ 与D1+M组比较,CP+M组热痛阈升高,脊髓SHH、ptch1、smo、gli1表达下调,gli3表达上调(P<0.05);与D2+M组比较,SAG+M组热痛阈降低,脊髓SHH、ptch1、smo、gli1表达上调,gli3表达下调(P<0.05);M+CP组与M+D1组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。与首次吗啡注射后30 min时比较,CP+M组热痛阈于吗啡注射第3~7天及吗啡给药结束后1~3 d时热痛阈降低(P<0.05)。

结论

小鼠吗啡耐受形成的部分机制与脊髓神经元SHH信号通路激活有关,而维持机制与其无明显关系。

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